180030. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bakteriosztatikus hatású anyag előállítására
7 180030 8 centrifugálás után maradt felszínen úszó fázis mennyiségével egyenlő mennyiségű fiziológiás oldattal szuszpendáltuk. Mind a biomasszát tartalmazó fiziológiás oldatot, mind a felszínen úszó folyadékot 2 ml-es mintákra osztottuk, Az első sorozat edényeibe 2 ml homogenizált biomaszszát tartalmazó fiziológiás oldatot adagoltunk. A második sorozat edényeihez csak 2—2 ml fiziológiás oldatot adtunk. A harmadik sorozat edényeihez, melyeket nem oltottunk be kórokozókkal, 2—2 ml homogenizált biomasszát tartalmazó fiziológiás oldatot adtunk. Az edényeket forgó keverőben inkubáltuk 37 °C-on. Optikai sűrűségüket 16 óra eltelte után határoztuk meg 600 nm-en. Az első, második és harmadik sorozatnak megfelelő optikai sűrűségmérések adatait rendre az 15 A, B és C paraméterek képviselik. Az A—C különbséget B-ből kivonjuk, a különbséget elosztjuk B-vel, és a hányadost 100-zal megszorozzuk, és így százalékos inhibícióként megkapjuk a biomassza bakteriosztatikus aktivitását. 20 A felszínen úszó fázis bakteriosztatikus aktivitását hasonlóképpen határozzuk meg, azaz az első és a harmadik sorozat edényeihez a homogenizált biomassza fiziológiás oldata helyett a felszínen úszó fázisból adunk 2—2 ml-t. Az alábbi táblázat szemlélteti az eredményeket: Kórokozó A biomassza aktivitása (%-os inhibíció) A felszínen úszó fázis aktivitása (%-os inhibíció) P. aeruginosa 70 4, S. aureus 100 45 E. coli 70 11 4. példa (összehasonlítás) Összehasonlítás céljából a 3.5. példában ismertetett módszerrel meghatározzuk a természetes baregin bakte- 5 riosztatikus aktivitását. 16 órás inkubálás után a P. aeruginosa, az S. aureus és az E. coli törzsekkel szembeni százalékos inhibíció rendre 100%, 83% és 96%. Az adatok szerint tehát, a találmány szerinti eljárással előállított biomassza bakteriosztatikus aktivitása majd- 10 nem ugyanolyan erős, mint a bareginé. Ez lényeges eredménynek számít, ha összevetjük a találmány szerinti eljárással előállított biomassza magas kitermelést biztosító ipari előállíthatóságát a baregin alacsony kitermelést biztosító, lassú kinyerhet őségével. A találmány szerinti eljárásban a felszínen úszó fázis aktivitása —jóllehet kisebb — nemkevésbé érdekes. 5. példa (NC1B törzsek) 8 törzset különítettünk el az 1. példában ismertetett módon. Ezt a 8 törzset 1978. július 12-én helyeztük letétbe a skóciai Aberdeenben levő National Collection of Industrial Bacteria (NCIB)-ben, és ahogy említettük 25 már az NCIB 114 18-tól az NCIB 114 25-ig terjedő sorszámokat kapták. Ezek a törzsek növekedésképességükkel, agar-agaron és folyékony táptalajban levő tenyészetük morfológiájával és bakteriosztatikus aktivitásukkal jellemezhetők. A 3.2. példában ismertetett módon 5, 10 és 24 órán át tenyésztett fent említett nyolc törzs és a 24 óra után nyert biomassza optikai sűrűségét, valamint a 8 órás tenyésztéssel nyert biomasszák P. aeruginosa, S. Aureus és E. coli kórokozó törzsekkel szembeni bakterioszta- 35 tikus aktivitását szemlélteti az alábbi táblázat. A törzsek morfológiáját külön ismertetjük. Törzs NCIB száma Optikai sűrűség Biomassza (g szárazanyag/Iiter) Aktivitás (%-os inhibíció) 5 ó után 10 ó után 24 ó után P. aeruginosa S. aureus E. coli 114 18 0,237 0,713 0,583 0,91 100 76 100 114 19 0,352 0,621 0,514 0,95 100 96 74 114 20 0,147 0,447 0,709 0,95 100 96 44 114 21 0,160 0,402 0,646 0,95 100 98 100 114 22 0,289 0,364 0,305 0,75 68 89 84 114 23 0,360 0,496 0,378 0,69 73 87 25 114 24 0,217 0,737 0,587 0,59 57 80 27 114 25 0,395 0,981 0,838 1,11 100 91 90 Morfológia 55 NCIB 114 18: Agar-agaron- fehér közepű, áttetsző szélű, 8—15 mm átmérőjű elkülönült telepeket alkot. Mikroszkopikus 60 vizsgálat (100-szoros nagyítás): a telepet tisztán kivehető, szorosan összecsavarodott spirálok alkotják. Folyékony tenyészetben: homogén tenyészet. Mikroszkopikus vizsgálat (400-szoros nagyítás): 1,8 X80 mikrométeres",'"Hosszú szálak, melyeket alkalmilag rövid, 65 egymástól elhatárolható baktériumok alkotnak. Nincsenek aggregációk. Nagyon kevés fénytörő zárvány. NCIB 114 19: Agar-agaron: diffúz határú, 4—8 mm átmérőjű, fehér színű elkülönült telepeket alkot. A telep közepéről csillag alakú, sugárirányú rostok indulnak ki, de nem érik el a telep határát. Mikroszkopikus vizsgálat (100- szoros nagyítás): a telep határait szorosan összecsavarodott szálak alkotják. 4
