179995. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a légzőszerven keresztűl beadható vakcina és késztmény előállítására
H 179995 12 A) táblázat Fertőzés utáni napok Kutyánkénti átlagos mikroorganizmus* szám Statisztikai különbség, °/0 vakcináit (telepet kialakító egység) kontroll (telepet kialakító egység) 6. 1,8 • 101 2,0 • 103 99,1 16. 3,0 • 101 2,0 • 103 98,5 21. 7,6 • 103 1,0 • 106 99,2 34. 2,2 • 102 1,9 • 106 99,9 * Bordetella bronchiseptica virulens fertőző törzse 3. példa A Bordetella bronchiseptica módosított 55. törzse triptóz-foszfát folyékony táptalajban való 24 órás tenyészetének hatodik átoltásából vett, 3 ml mennyiségét vattadugós lombikban levő 50 ml triptóz-foszfát folyékony táptalajra oltottuk be, és 37°-on 24 vagy 48 óra hosszat inkubáltuk. A triptóz-foszfát folyékony táptalajban tenyésztett, élő 55. törzs hetedik átoltását használtuk fel a sertések intranazális vakcinálására. Első adagként a 24 órás tenyészetet, második és a többi ezt követő adagként a 48 órás tenyészetet adtuk be. Az 55. törzs triptóz-foszfát táptalajon 24 órás hetedik átoltása ml-enként mintegy 1 • 106 sejtet és a triptóz-foszfát talajon 48 órás tenyészet körülbelül 1 • 107 sejtet tartalmazott. Ezeket a titereket 5%-os lóvér agar táptalajon telepet kialakító egységként határoztuk meg. A vakcinákat előállításuk napján adtuk be. Mindegyik, intranazálisan immunizált sertésbe orrcseppek alakjában orrlyukanként a 24 órás és 48 órás triptóz-foszfát folyékony táptalajon való tenyészetnek 0,5 ml-es adagját juttattuk. Az 5 ml-es fecskendő hegyét beillesztettük mindegyik orrlyukba, és a tenyészetet becsepegtettük az orrüregbe. A tenyészet beadását a disznó belélegzésével időzítettük. A Bordetella bronchiseptica csekély virulenciájú, élő 55. törzsével való intranazális vakcinálásnál a vakcinának azt a képességét vizsgáltuk, hogy orrüregi rezisztenciát képes-e létrehozni a későbbi, Bordetella bronchiseptica disznóban virulens (B) törzse által okozott fertőzés ellen. Az 55. törzs fertőzésnek megmaradását az orrban szintén megvizsgáltuk. Náthamentes csordából kiválasztott, 4—8 hetes 13 malacot használtunk a kísérletekben. Mindegyik malac mentes volt Bordetella bronchisepticatól. A malacokat két csoportba osztottuk és egyenként, elkülönítetten tartottuk. Hat malacot 7 hetes korukban négy napos időközök- 5 ben intranazálisan csekély virulenciájú 55. törzs vakcinájának három adagjával beoltottuk és hét malac oltatlan kontrollként szolgált. Mindegyik malacot az intranazális vakcinálás után 3 héttel virulens Bordetella bronchiseptica B törzzsel fertőztük meg. Az intranazá- 10 lis vakcinálás után 2 héttel a vakcináit malacok orrváladékában az orrkenet tenyésztés módszerével az 55. törzs nem volt kimutatható. A Bordetella bronchiseptica előfordulását a B törzszsel fertőzött malacok orrváladékában a B) táblázat- 15 ban összesítettük. A B törzzsel való fertőzés után 3 héttel a vakcináit malacok közül egy sem és a 7 kontroll malac közül 5 tenyészete volt Bordetella bronchisepticapozitív. A B törzzsel való fertőzés után 4 héttel a 6 vakcináit malac közül háromnak orrváladéka Bordetella 20 bronchiseptica-pozitív volt és a lemezenkénti átlagos telepszám 6 volt. A nyolc hét után meghatározott telepszám 6-ból 0, illetve 7-ből 7 volt. A kísérlet befejezésekor az átlagos szérum-titer a vakcináit malacoknál 39 és a nem vakcináit kontroll állatoknál 53 volt. Bonco- 25 láskor szabad szemmel látható volt, hogy az intranazálisan immunizált malacok orrkagylócsontja normális volt, míg a 3 vizsgált kontroll állat közül kettőnél mérsékelttől súlyosig terjedő orrkagylócsont-sorvadást állapítottunk meg. 30 A szabad szemmel látható orrkagylócsont-sorvadást a következőképpen állapítottuk meg. A második premoláris fog szintjén az orrüreg keresztmetszetét állítottuk elő. Az orrkagylócsont durva torzulását vagy sorvadását és orrsövény-elégtelenséget állapítottunk meg, 35 ami a súlyosságtól függően enyhe, mérsékelt vagy súlyos volt. 4. példa 40 Nincs olyan bizonyíték, ami a Bordetella bronchiseptica 55. törzsének sertésben való megmaradását vagy sertésre való átvitelét mutatná. Mivel a sertésről sertésre való átvitel kimutathatatlan, az 55. törzs virulenciájának 45 esetleges fokozódása meghatározására ezt a mikroorganizmust 6—8 napos embriót tartalmazó tyúktojásokba tizenegyszer átoltottuk, majd 3 hetes baktérium-érzékeny malacok orrüregébe juttattuk. A Bordetella bronchi-B) táblázat Bordetella bronchiseptica-pozitív disznók száma az összevizsgált között Sertés/termék Sertésele száma 131 ökísérlet B. bronchiseptica virulens B törzzsel való fertőzés után eltelt hetek Boncolásnál talált nagymértékű orrkagylócsont sorvadás 3 4 6 8 4—8 hetes malacok intranazális vakcinálása élő, kis virulenciájú 6 0/6 0/6 3/6 0/6 0/6 0/6a 55. törzzsel 4—8 hetes nemvakcináit kontroll malacok 7 0/7 5/7 6/7 6/7 7/7 2/3 a A boncolt malacok közül nagymértékű orrkagylócsont-sorvadást mutató malacok száma. 6
