179990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polopeptidek előállítására

15

179990

16

43. lépés (A=D-Phe)

50. lépés (A=D-Trp)

Az előzőek szerint elkészített metilészter (3,42 g,

5,04 millimól) és hidrazin-hidrát (60 millimól) 30 ml dimetilformamiddal képezett oldatát szobahőmérsék- 5 Jeten 4 órán át keverjük, majd kis térfogatra bepároljuk és a hidrazidot 500 ml víz hozzáadásával kicsapjuk, leszűrjük, vízzel, 1: 4 térfogatarányú metanol-éter elegygyel és éterrel mossuk, majd szárítjuk. Kitermelés:

2,94 g (85,‘9%). Op.: 179—Í80 C°. RfA 0,81, RfB 0,79, 10 RfC 0,88, RfD 0,69, RfE 0,49, RfF 0,65, RfH 0,67, RfP 0,25, RfQ 0,57.

44. és 45. lépés (A=D-Phe)

J5

1,83 ml 6,02 mólos dioxános sósavat (11 millimól)

—20 C°-on 1,86 g (2,75 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-D-fenilalanil-L-leucin-hidrazid és 5 ml dimetilformamid oldatához adunk, majd 0,33 ml (2,89 millimól) tercier butílnitritet adunk hozzá. 2 perc 20 elteltével 1,89 ml (13,5 millimól) trietilamin, 1,02 g (2,5 millimól) N”-nitro-L-arginil-L-prolil-azaglicin-amid-hidroklorid és 10 ml dimetilformamid —20 C°-ra előhűtött oldatát adjuk hozzá és a reakcióelegyet egy éjjelen át 4 C°-on keverjük, majd a szokásos triódon fel- 25 dolgozzuk. A kapott hexapeptid-származékot szilikagéloszlopon (120 g) történő kromatografálással tisztítjuk; eluálószerként 5 tf%metanolt tartalmazó kloroformot,

10 tf% metanolt tartalmazó kloroformot és 11 : 8 : 2 térfogatarányú kloroform-metanol-víz elegyet alkalma- 30 zunk. Kitermelés: 0,74 g (29,3%). Op.: 137—139 C°.

RfA 0,68, RfB 0,72, RfC 0,58, RfD 0,62, RfH 0,39,

RfK 0,95.

35

46., 47. és 48. lépés

L-piroglutamil-L-hisztidin-hidrazidot (10 millimól) az m) általános eljárás szerint aziddá alakítunk és L-triptofil-L-szerint-metiJészterrel (11 millimól) kapcsolunk 40 (ez utóbbi vegyületet a megfelelő N-benziloxikarbonilszármazékból 5 súly%-os palládium/szén katalizátor jelenlétében dimetilformamidban történő hidrogénezéssel állítjuk elő). A reakcióelegyet —10 C°-on 30 percen át, majd 4 C°-on 24 órán keresztül keverjük. A kiváló 45 trietilamin-hidroklorídot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet szárazra pároljuk. A nyers pepiidet szilikagél-oszlopon történő kromatografálással tisztítjuk, eluálószerként 10 tf% metanolt tartalmazó kloroformot, 20 tf% metanolt tartalmazó kloroformot és 11 : 8 : 2 térfogat- 50 arányú kloroform/metanol/víz elegyet alkalmazunk. Kitermelés: 70%. Op. : 142—145 C° (bomlás). RfA 0,39,

RfB 0,72, RfC 0,45, RfD 0,48, RfK 0,61.

55

49. lépés

5,4 millimól L-piroglutamiJ-L-hisztidil-L-triptofil-L-szerin-metilésztert 70 ml dimetilformamidban oldunk és 100 millimój hidrazinhidráttal 4 órán át kezeljük. 60 A dimetilformamidot vákuumban eltávolítjuk, a maradékot etanollal kezeljük, szűrjük, etanollal és éterrel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 88,2%. Op.: 184—

189 C°. RfA 0,18, RfB* 0,55, RfC 0,39, RfD 0,27,

RfK 0,58. 65

4,87 g (23,6 millimól) diciklohexilkarbodiimidet

7,27 g (21,5 millimól) N-benziloxikarbonil-D-triptofán, 3,12 g (21,5 millimól) leucin-metilészter és 5,8 g (43 millimól) 1-hidroxi-benzotriazol 50 ml dimetilformamiddal képezett oldatához adunk 0 Cc-on. A reakcióelegyet egy éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük és szokásos módon feldolgozzuk. Étilacetát és petroléter (fp.: 60— 80 C°) elegyéből történő átkristályosítás után 9,55 g dipeptid-származékot kapunk, mely v.r.k. meghatározás szerint nyomokban szennyezéseket tartalmaz. A terméket szilikagél-oszlopon (300 g) történő kromatografálással tisztítjuk, eluálószerként kloroformot és 5 tf% metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazunk. Kitermelés:

9,18 g (91,7%). Op.: 151—153 C°. RfA 0,84, RfB 0,8Ö, RfC 0,86, RfD 0,78, RfE 0,61, RfF 0,68, RfH 0,73, RfP 0,55, RfQ 0,73.

51. lépés (A=D-Trp)

A katalitikus redukciót 80 tf%-os vizes dimetilformamidban, 5 súly%-os palládium—szén katalizátor jelenlétében 5 órán át végezzük.

52. lépés (A=D—Trp)

11,69 g (20 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozin-2,4,5-triklórfenil-észter és 6,28 g (19 millimól) D-triptofil-L-leucin-metilészter 10Ö ml dimetilformamiddal képezett oldatát szobahőmérsékleten 60 órán át keverjük. A reakcióelegyet szokásos módon dolgozzuk fel és a maradékot etilacetát-petroléter (fp.: 60—80 C°) elegyből kristályosítjuk. 8,52 g (62,5%) tripeptid-származékot kapunk. Op.: 165—166 C°. RfA 0,78, RfB 0,73, RfC 0,84, RfD 0,80, RfE 0,62, RfF 0,70, RfH 0,76, RfP 0,58, RfQ 0,68.

53. lépés (A=D-Trp)

7,26 g (10,1 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-D-triptofil-L-leucin-metilésztemek 200 ml metanol és 50 ml dimetilformamid elegyével képezett oldatát szobahőmérsékleten 100 millimól hidrazinhidráttal kezeljük. Az oldatot 24 óra múlva kb. 3Ö'mÍ-re bepároljuk és a maradékhoz 500 ml vizet adunk. A tripeptid-hidrazidot összegyűjtjük, vízzel, 1 : 4 térfogatarányú metanol/éter eleggyel és éterrel mossuk, majd szárítjuk. Kitermelés : 6,86 g (94,6%). Op. : 200—202 C°. RfA 0,90, RfB 0,95, RfC 0,90, RfD 0,74, RfQ 0,59.

54. és 55. lépés (A=D-Trp)

1,97 g (2,75 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-D-triptofil-L-leucin-hidrazid és 10 ml dimetilformamid oldatát keverés és —20 C°-ra való hűtés közben 1,83 ml 6,02 mólos dioxános sósavval (11 millimól), majd 0,33 ml (2,89 millimól) tercier butilnitrittel kezeljük. 2 perc elteltével 1,02 g (2,5 millimól) N“-nitro-L-arginil-L-prolil-azaglicinamid-hidroklorid, 1,89 ml (13,5 millimól) trietilamin és 10 ml dimetilformamid —20 C°-ra előhűtött oldatát adjuk hozzá és a reakcióelegyet egy éjjelen át 4 C°-on keverjük. A reakcióelegyet a szokásos módon dolgozzuk fel, a maradékot (1,27 g) szilikagél-oszlopra (230 g) felvisszük és az oszlopot klo8