179930. lajstromszámú szabadalom • 3,3',5,5'-tetraalkil-benzidin tartalmú gyorstesztek
3 179930 4 ha o-tolidin helyett I általános képletű 3,3',5,5'-tetraalkil-benzidineket használunk, ahol Rj, R2, Rj és R4 azonos vagy különböző és jelentése egyenes vagy elágazó láncú, kisszénatomszámú, 1— 6, előnyösen 1—4 szénatomot tartalmazó alkilcsoport. A találmány tehát tesztpapír hidrogén-peroxid, hidrogén-peroxid képződése közben reagáló anyagok és peroxidáló hatású anyagok kimutatására és meghatározására, amely tesztpapírt szívóképes papírnak 100 ml oldószerben levő 0,01—0,5 g peroxidázzal, illetve 0,1—■ 2 g hidroperoxiddal, 0—20 g 5—7 pH-értékű pufferral, 0—5 g nedvesítőszerrel, 0—15 g aktivátorral és 0,1—1 g kromogénnel végzett impregnálásával és szárítással állítunk elő, azzal jellemezve, hogy kromogénként I általános képletű 3,3',5,5'-tetraalkil-benzidint tartalmaz. Az I általános képletű vegyületek ismert módon állíthatók elő, bár eddig közelebbről csak a 3,3',5,5'-tetrametil-benzidint [V. R. Holland és munkatársai, Tetrahedron 30, 3299—3302 (1974)] és a 3,3',5,5'-tetraetil-benzidint [R. Stroh és munkatársai, Angew. Chem. 69, 124—131 (1957)] jellemezték. V. R. Holland és munkatársai fent idézett közleménye szerint a tetrametil-benzidint önmagában ismert módon az ismert 2,2',6,6'-tetrametil-azo-benzol cinkporos redukciójával és ezt követő benzidinátrendezéssel állítják elő. Az eddig le nem írt 3,32-dimetiI-5,52-díetiI-benzidin és 3,3i,5,5i-tetraizopropiI-benzidin vegyületek például Stroh és munkatársai fent idézett közleménye alapján o-tolidinből és etilénből, illetve benzidinből és propilénből állíthatók elő, További módozatok, melyeknek elvileg a még le nem írt, nagyobb szénatomszámú alkilszármazékokhoz is járhatóknak kell lenniök, a következők: a) 2,6-Dialkil-anilin oxidációja lúgos vas(III)-cianiddal [vö.: V. R. Holland, idézett közlemény; G. Schulz, Ber. dtsch. chem. Ges. 17, 476—78 (1884); E. Haselbach, Helv. chem. Acta 53, 1526—43 (1970)]. b) 2,6-Dialkil-anilin oxidációja ezüst(II)-oxiddal [vö.: B. Ortiz és munkatársai, J. Org. Chem. 37, 2748—50 (1972)]. c) 2,6-DialkiI-nitro-benzol redukciója lítium-alumínium-hidriddeí [vö. : R. F. Nyström és H. C. Brown, J. Amer. Chem. Soc. 70, 3738 —40 (1948)]. d) 2,6-Dialkil-benzol-diazóniumsók reakciója ammóniás réz(I)-oldattal [vö.: D. Vorländer és F. Mayer, Liebigs Ann. Chem. 320, 122—144 (1902)]. Az ilyen módon kapott azo-benzolok hidrazo-benzolokká való további redukciója és a hidrazo-benzolok (részben egyidejű) benzidin-átrendezése ismert módon történik (például Houben-Weyl X/2, 705—724 és X/l, 839—848). A 3,3',5,5'-tetrametil-benzidin szerkezet alapján várható elvi alkalmasságát a székletben és vizeletben levő, szabad szemmel nem látható vér kimutatására V. R. Holland és munkatársai fent idézett közleményükben írták le, ahol az o-tolidinnal szembeni előnyként a kisebb fokú karcinogenitást emelték ki. De az aminnak és kationgyökének váratlanul nagyobb stabilitását a gyorstesztben Holland nem írja le, mivel megfelelő kísérleteket nem végzett. A kísérletek elvégzésére nem is volt ok, mivel a gyorstesztek felhasználója a reagenseket közvetlenül nem kezeli, tehát a karcinogenitás kérdése gyakorlatilag nem játszik szerepet. • Az I általános képletű vegyületeket olyan gyorstesztekre is leírták, melyekkel testfolyadékok halogenidjei és pszeudohalogenidjei mutathatók ki (818 344 számú kanadai szabadalmi leírás). Ezek a gyorstesztek még réz(II)-vegyületeket is tartalmaznak, melyek a halogenidekkel réz(I)-halogenidek és szabad halogének képződése közben reagálnak, melyek a maguk részéről a benzidin-vegyületeket oxidálják. Ez az oxidáció nyilvánvalóan ugyanazokhoz a színes kationgyökökhöz vezet, mint a peroxidázzal katalizált hidroperoxid-oxidáció. Az említett szabadalmi leírásban a sok benzidinszármazék közül előnyben részesítik az o-tolidint (3,3'-dimetil-benzidin), amiből arra lehet következtetni, hogy a tetraalkil-benzidinek gyorstesztekhez kevésbé alkalmasak. Az I általános képletű vegyületek és kationgyökeik nagyobb stabilitása annyiban is meglepő, amennyiben a további alkilcsoportok elektrontaszító hatása miatt inkább fokozott oxidálhatóság és ezzel barna kinon-diiminné való továbbreagálás lenne várható. A találmány szerinti tetraalkil-benzidinek minden olyan esetben használhatók, amelyekben eddig otolidint használtak, az ismert összetételek esetleges módosítása mellett. Adott esetben a színstabilizálásra használt anionos nedvesítőszerek kevésbé aktívakkal helyettesíthetők vagy egészen elhagyhatók. így a tetraalkil-benzidinek például vizeletben levő glükóz és vér, szérum-koleszterin, tejben levő hidrogén-peroxid kimutatására szolgáló tesztpapírokban, vagy a vér és szérum glükóztartalmának meghatározására alkalmas tesztfilmek, ben és sok egyéb tesztben használhatók. E tesztek mindegyike azáltal tűnik ki, hogy színreakcióik élénkebbek, stabilabbak és részben árnyaltabbak, mint o-tolidin használatakor, mivel a tetraalkil-benzidinek kationgyökeinek kékeszöld-zöld színét nem „piszkítja” a barna kinon-diimin. A következő példákban leírt gyorsteszteknél különösen szembetűnőek a találmány szerinti tetraalkil-benzidinek tulajdonságai és e vegyületcsoport egyes képviselőinek adott esetben még különösen előnyös hatásai is lehetnek. így az I általános képletű tetraalkil-benzidinek fokozott eltarthatósága az o-tolidinnal szemben különösen a vizeletben levő vér kimutatására szolgáló tesztpapírok tárolásánál mutatkozik meg. Tetraetil-benzidint használva a vizelet-glükóz próbához olyan tesztpapírok állíthatók elő, melyeknél a reakciószín szinte napokon át változatlan marad, ami különösen jelentős korai betegség-felismerési akcióknál, amikor a vizsgált személyek a felhasznált tesztcsíkokat központi kiértékelő állomásra továbbítják. A következő példák közelebbről megvilágítják a találmányt. 1. példa Teszpapír vér kimutatására vizeletben Szűrőpapírt (Schleicher-Schüll 23 SL) egymás után a következő oldatokkal impregnálunk, majd 40 °C-on szárítunk: 1. oldat 1,2 M citrátpuífer, pH 5,25 35,0 ml, Dinátrium-etilén-diamin-tetraacetát 0,1 g, Dioktil-nátrium-szulfo-szukcinát 0,5 g, 5 10 15 20 25 30 35 4C 45 50 55 60 65 2
