179926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a gasztrin C-terminális tetrapeptid- szekvenciájának előállítására

3

179926

4

értelmében költség- és munkaigényes védőcsoportok nélkül alkalmazzuk, ami lehetővé teszi a szintézis-lépések számának a csökkentését is. A találmány szerinti eljárással előállítható tetrapeptid azután Boc-ß-alaninnal az N-terminálisan történő kapcsolás útján, önmagában ismert módon pentagasztrinná alakítható.

A gasztrin C-terminális tetrapeptidjének az előállítására a találmány szerint alkalmazott szintézis-stratégia az alábbi vázlattal szemléltethető:

mérsékletre hűtjük és 0,5 ml 50%-os ecetsavat adunk hozzá. Az ennek során kiváló további diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban betöményítjük, majd 60 ml etanol hozzáadása útján leválaszt- 5 juk az Nps-triptofanil-metionin-metilésztert, amely 120—125 °C-on olvad; [a]“=—58,0° (c=l, metanolban).

Hozam: 3,0 g (78%).

Rf (butanol, jégecet és víz 4: 1:1 arányú elegyében): 10 0,78.

Nps-Nps- Nps- Nps- Nps- H —

Trp

Met

Asp

Phe-OH HTrp-OMe Z—OTcp OBzl-OMe -OH H

Met

OTcp OTcp HAsp ■-Phe-NH,

NH,

NH,

15

20

25

Az ismert módon előállított Nps-Trp. DCHA-t a diciklohexil-karbodiimid-módszerrel kapcsoljuk Met- 30 -OMe.HCl-lel a Nps-Trp-Met-OMe dipeptiddé. Ezután felszabadítjuk a dipeptid-metilésztert. A Z-Asp-ß-OTcp-ß-OBzl-böl katalitikus hidrogénezés útján kapjuk só alakjában az Asp-a-OTcp-t. Az Nps-Trp-Met-OH Asp-OTcp-vel a megfelelő tripeptiddé történő reá- 35 gáltatását a vegyes anhidrides módszerrel végezzük. Az így kapott tripeptid azután a Phe-NH2 amiddal azonnal a kívánt Nps-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 tetrapeptiddé kapcsolható. A tetrapeptid NH2-csoportjának a felszabadítása az Nps-védőcsoportot ismert lehasítási módszeré- 40 vei, 2-metil-indol és ammónium-rodanid alkalmazásával történik.

A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját az alábbi példa szemlélteti; megjegyzendő azonban, hogy a találmány köre semmilyen szempontból nincs e 45 konkrét példa tartalmára korlátozva.

Példa

50

a) Nps-triptofanil-metionin-metilészter (Nps-Trp-Met-OMe)

4,0 g Nps-Trp-DCHA 120 ml kloroformmal készített oldatához 1,49 g metionin-metilészter-hidrokloridot 55 adunk. Az oldatot 0 °C hőmérsékletre hűtjük és kis részletekben 1,7 g diciklohexil-karboddiimidet adunk hozzá.

Az elegyet szobahőmérsékleten 20 óra hosszat keverjük, majd kivált diciklohexil-karbamidot szűréssel elkülönítjük és a kloroformos szűrletet 50—50 ml 0,5%-os nátri- 60 um-karbonát-oldattal kétszer, majd 50—50 ml 2%-os kénsavoldattal kétszer és végül vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és leszűrjük. A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A kapott olajos maradékot 100 ml tetrahidrofuránban oldjuk, az oldatot 0 °C hő- 65

b) Nps-triptofanil-metionin-diciklohexilaminsó (Nps-Trp-Met-OH. DCHA)

3,0 g Nps-Trp-Met-OMe 120 ml acetonnal készített oldatához 6,6 ml n nátrium-hidroxid-oldatot adunk. Az oldatot szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A kapott olajos maradékot 100 ml vízben oldjuk és 0 °C hőmérsékleten 5%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal 2,0 pH-értékre savanyítjuk. Ennek során olajos termék válik ki, ezt etil-acetátban oldjuk, az oldatot 40—40 ml vízzel háromszor mossuk és vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk. Ezt követően 1,2 g diciklohexil-amint csepegtetünk az etil-acetátos oldathoz, aminek hatására, hűtés közben, lassan kiválik az Nps-triptofanil-metionin diciklohexil-amin-sója.

Hozam: 1,2 g (69%); [a]“ =—31,5° (c= 1, metanolban).

Rf (butanol, jégecet és víz 4: 1:1 arányú elegyében): 0,76.

A termék olvadáspontja nem volt meghatározható; 50 °C-tól kezdődően egy 30 °C-os olvadási tartományban lassú bomlás következik be.

Aminosav-analízis :

számított Trp : Met= 1: 1 ;

talált Trp : Met=l : 0,8.

c) Aszparaginsav-a-triklórfenilészter

5,0 g Z-aszparaginsav-ß-benzileszter-a-triklorfenildsztert 150 ml jégecetben keverés közben oldunk. Az oldatot tisztára szűrjük, majd a szűrlethez 2,0 g Pdo/BaS04 katalizátort adunk. A készüléket előbb nitrogéngázzal átöblítjük, majd keverés közben hidrogént vezetünk az oldaton keresztül- 1 óra múlva 10 ml dioxános 3,5 n sósavoldatot adunk cseppenként a hidrogénezési reakcióelegyhez, hogy így a reakcióterméket hidrokloridsóvá alakítsuk. Az eközben eltávozó gázt bárium-hidroxid-oldattal vizsgáljuk szén-dioxid-tartalomra. 3 óra múlva vékonyrétegkromatográfiával is ellenőrizzük a reakció előrehaladását. 15 óra múlva már kiindulási anyag nem mutatható ki az oldatban. Ekkor a hidrogénezési befejezzük és a katalizátort kiszűrjük. A szűrletet vákuumban, rotációs bepárlókészülékben 40 °C hőmérsékleten bepároljuk. A maradékként kapott olajat 10 ml metanolban oldjuk és lassan, keverés közben becsepegtetjük 200 ml hideg petroléterbe. Ennek során higroszkópos fehér kristályok válnak ki, ezeket leszívatással gyorsan elkülönítjük és exszikkátorban megszárítjuk. Az így kapott aszparaginsav-a-triklórfenilészter olvadáspon(ja 130—134 °C; Rf (butanol, jégecet és víz 4: 1: 1 arányú elegyében): 0,19. Hozam: 3,1 g (86%).

2