179912. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliéter antibiotikum előállítására
9 179912 10 államokbeli szabadalmi leírásban szerepelnek, mely felfedezés ennek a találmánynak is részét képezi. A találmány szerinti eljárás részletesebb jellemzésére a következő példákat mutatjuk be. Ezek a példák azonban nem korlátozzák a szabadalmi leírás érvényességi 5 körét. 1. példa A DeBoer és munkatársai által leírt Streptomyces lydicus NRRL 12 034 törzs részére a következő ferde agar táptalajt használjuk: dik fázisú lombikok beoltására nagyobb mennyiségű micélium előállításához. A termelő táptalajból kivett 200 ml térfogatot 1 literes Erlenmeyer lombikba helyeztük, és 121 °C-on, 30 percig sterileztük. Lehűlés után a lombikokat a vegetatív oltóanyag 5%-nyi mennyiségével oltottuk be. A tenyészetet 108/perc löketszámú, 5 cm lökethosszú sík rázógépen inkubáltuk. A 72 órás fermentáció végén a fermentlé pH-ja körülbelül 8,0. A fermentációt 30 °C-on végeztük. 2. példa Adalékanyagok Mennyiség (g/l) 15 A narasint a következő összetételű steril termelő táptalaj használatával állítottuk elő: burgonyadextrin 10,0 enzim-hidrolizált kazein1 2,0 húskivonat 1,0 élesztőkivonat 1,0 agar 2,0 Czapek-féle sóoldat 2,0 ml/1 desztillált víz 1000 ml-re 1 N-Z-Amin A (Humko Sheffield Chemical Co., 25 Memphis, Tenn.). A Czapek-féle szervetlen sóoldatot a következő adalékanyagokból készítjük: Adalékanyag Mennyiség (g /100 ml) kálium-klorid 10,0 magnézium-szulfát 7 molekula víz 10,0 vas(ll)-szulfát 7 molekula víz 0,2 desztillált víz 100 ml-re Adalékanyag Mennyiség (g/l) szilikon habzásgátló anyag1 0,2 glükóz 10,0 melasz 20,0 pepton 5,0 kalcium-karbonát 2,0 desztillált víz 9,0 1-re 1 Dow-Coming Antifoam A. Ezt a termelő táptalajt, melynek a pH-ja 6,7, az 1. pél- 30 dában leírt második fázisú inokulum táptalajból 2%-nyi mennyiséggel oltottuk be. A beoltott termelő táptalajt 10 liter térfogatú tank-fermentorban körülbelül 3 napig, körülbelül 30 °C-on hagytuk növekedni. A fermentációs táptalajt steril levegővel levegőztettük 0,5 v/v/m sebes- 35 séggel, és megszokott keverőkkel körülbelül 400/perc fordulatszámmal kevertettük. A DeBoer és munkatársai féle Streptomyces lydicus NRRL 12 034 törzs spóráit a fentiekben meghatározott adalékanyagokat tartalmazó ferdített tápagar felszínére 40 oltottuk, és az így inokulált ferdített agartenyészetet körülbelül 7 napig inkubáltuk körülbelül 30 °C-on. Az érett ferde tenyészetre vizet töltöttünk, és megfelelő steril szerszámmal meglazítottuk a spórákat és a micéliumot. Az így nyert spóraszuszpenzióból 1 ml-t hasz- 45 náltunk arra, hogy a következő összetételű táptalaj 50 ml-ét beoltsuk vele: 3. példa A narasint a 2. példa szerinti eljárással állítottuk elő, de a következő összetételű steril termelő táptalaj használatával: Adalékanyag Mennyiség (g/l) Adalékanyagok Mennyiség (g/l) dextróz 15,0 szójaliszt 15,0 kukorica-lekvár 5,0 kalcium-karbonát 2,0 nátrium-klorid 5,0 Czapek-féle sóoldat 2,0 ml/1 desztillált víz 1000 ml-re szilikon habzásgátló anyag1 0,2 glükóz 25,0 kukoricakeményítő 10,0 folyékony húspepton 10,0 enzim-hidrolizált kazein2 4,0 melasz, Blackstrap 5,0 magnézium-szulfát (7 molekula víz) 0,5 Czapek-féle sóoldat 2,0 ml desztillált víz 9,0 1-re A vegetatív oltóanyagot 250 ml-es, széles szájú Erlenmeyer lombikban inkubáltuk körülbelül 30 °C-on, körülbelül 48 óráig olyan rotációs rázógépen, mely 5 cm átmérőjű kör kerületén 250-szer fordult percenként. Az így inkubált táptalajt használtuk mind kis térfogatú fermentorok oltására (az oltóanyag mennyisége körülbelül 1 térfogat/Z-a a táptalajnak), mind pedig a máso-1 Dow-Corning Antifoam A. 2 N-Z-Amin A (Humko Sheffield Chemical Co., Memphis, Tenn.). Ezt a termelő táptalajt, melynek a pH-ja 6,5, oltottuk 2% oltóanyaggal, és 10 literes tank-fermentorban növesztettük 4 napig, körülbelül 30 °C-on. A fermentációs 60 65 5
