179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
* 179788 26 időre, hogy az oldat feleslegét eltávolítsuk, majd vizsgálati lemezre helyezzük és 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül inkubáljuk. Mérjük a gátló zóna átmérőjét és összehasonlítjuk a standard cefaloridin-oldat esetén kapott értékkel. À PS—6 és a többi antibiotikum mikrobaellenes hatását cefaloridin ekvivalens egység/mlben fejezzük ki. Közelebbről, az a PS—6 vagy más találmány szerinti antibiotikum-oldat, mely ugyanolyan késleltető zónát mutat, mint 100 iig/ml cefaloridin, megfelel 100 cefaloridin egység/ml értéknek. Ugyanígy, ha a PS—6 vagy más találmány szerinti szilárd antibiotikum minta 1 mg/ml koncentrációban ugyanolyan átmérővel rendelkezik, mint 1 [Ag/ml cefaloridin, a szilárd minta fajlagos hatása 1 cefaloridin egység/mg értékkel jellemezhető. Átlagos képzettségű szakember előtt ismeretes, hogy a standard görbe a vizsgált mikroorganizmus fajtától függően bizonyos mértékben változhat. A vizsgált mikrobák fajtáinak jelölésére a következő kifejezéseket vezetjük be: Comamonas-cefaloridin egység (rövidítése CCU), Staphylococcus-cefaloridin egység (rövidítése SCU), Alcaligenes-cefaloridin egység (rövidítése ACU). 2. Bioautográfia Az 1. pontban leírtakkal analóg módon nagyméretű vizsgálati lemezt készítünk, azzal az eltéréssel, hogy 100 ml beoltott, megolvasztott agar táptalajt 9 cm átmérőjű Petri-csésze helyett 32 x 24 cm-es téglalap alakú edénybe öntünk. A vizsgálandó papírkromatogramot 15 percre a fent leírt nagyméretű vizsgálati lemezre helyezzük. A papír eltávolítása után a vizsgálati lemezt 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül inkubáljuk és így gátló zónát kapunk. Ebből nemcsak az Rf értékek (kvalitatív vizsgálat) számíthatók, hanem meghatározható a mikrobaellenes hatás (fél-kvantitatív vizsgálat) is. Vékonyréteg-kromatográfiás lemez használata esetén a vékonyréteg-kromatográfiás lemez és a vizsgálati lemez felülete közé vékony papírt helyezünk. A fentiekhez hasonlóan végezzük a kvalitatív és fél-kvantitatív vizsgálatot. 1. példa 500 ml-es Erlenmeyer lombikot, mely az alábbi oltótenyészet táptalajt tartalmazza (SE—4) 120 °C hőmérsékleten 15 percen keresztül sterilizálunk. Jól szaporodó Streptomyces sp. A271 ferde tenyészethez hozzáöntünk 10 ml 0,02%-os Tween—80 (felületaktív anyag, Trademark of Atlas Powder Corp.) oldatot és enyhén keverjük, így spóraszuszpenziót kapunk. Ennek a spóraszuszpenziónak 1 ml-ét beleoltjuk az 500 ml-es Erlenmeyer lombikba és forgórendszerű rázógépen (200 ford/perc, a kör sugara 3,5 cm) rázás közben 28 °C hőmérsékleten 48 órán keresztül tenyésztjük. Ezután az oltótenyészet 2 ml-ét beleoltjuk egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikba, mely az alább felsorolt termelési táptalajokat tartalmazza és forgórendszerű rázógépen rázás közben 28 C hőmérsékleten 48—96 órán keresztül tenyésztjük. Bizonyos időközönként minden edényben levő tenyésztési táptalajból kis mennyiségű mintát veszünk. A mintákból extraháljuk az aktív komponenseket és koncentráljuk. A PS—6 és PS—7 antibiotikumok jelenlétét papírkromatográfiával és bioautográfiával mutatjuk ki, az alább leírt módon. Oltó tenyészet táptalaj (SE—-4) Marhahús extraktum (Difco Laboratories) 0,3% (súly/tér fogat) Bacto-tryptone (Difco Laboratories) 0,5% (súly/térfogat) Glükóz 0,1% (súly/térfogat) Oldható keményítő 2,4% (súly/térfogat) Élesztő extraktum 0,5% (súly/térfogat) Kalcium-karbonát 0,4% (súly/térfogat) Zsírtalanított szójababliszt 0,5% (súly/térfogat) a sterilitás előtt a pH=7,5 Termelési táptalaj (1) AG—1 táptalaj Glükóz 1,5% (súly/térfogat) Kukoricakeményítő 2,5% (súly/térfogat) Kukoricafőzet 2,0% (súly/térfogat) Száraz élesztő 1,0% (súly/térfogat) D,L-metionin 0,1% (súly/térfogat) Kobaltklorid 0,00013% (súly/térfogat) a sterilitás előtt a pH=7,2 (2) AGA—2 táptalaj Glükóz 1,5% (súly/térfogat) Burgonyakeményítő 2,5% (súly/térfogat) Kukoricafőzet 2,0% (súly/térfogat) Száraz élesztő 1,0% (súly/térfogat) Kobaltklorid 0,00013% (súly/térfogat) a sterilizálás előtt a pH= 6,5 (3) AGB-táptalaj Maltóz 3,0% (súly/térfogat) Kukoricafőzet 1,0% (súly/térfogat) Száraz élesztő 1,0% (súly/térfogat) Kobaltklorid 0,0001 (súly/térfogat) a sterilizálás előtt a pH= 6,5 (4) AGB—41 táptalaj Maltóz 5,0% (súly/térfogat) Oldható keményítő 1,0% (súly/térfogat) Glicerin 0,3% (súly/térfogat) Száraz élesztő 2,5% (súly/térfogat) Nátriumklorid 0,5% (súly/térfogat) Kálium-hidrogénfoszfát 0,05% (súly/térfogat) Magnézium-szulfát 0,05% (súly/térfogat) Kalcium-karbonát 0,3% (súly/térfogat) Kobaltklorid 0,00013% (súly/térfogat) a sterilizálás előtt a pH= 7,0 (5) ML—19 táptalaj Glicerin 4,0% (súly/térfogat) Pepton 0,5% (súly/térfogat) Glükóz 0,2% (súly/térfogat) Burgonyakeményítő 0,2% (súly/térfogat) Zsírtalanított szójababliszt 0,5% (súly/térfogat) Száraz élesztő 0,5% (súly/térfogat) Nátriumklorid 0,5% (súly/térfogat) Kalcium-karbonát 0,2% (súly/térfogat) a sterilizálás előtt a pH= 6,4 (6) AGO—1 táptalaj Szójabab olaj 3,0% (súly/térfogat) Száraz élesztő 2,0% (súly/térfogat) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
