179778. lajstromszámú szabadalom • Reagens készítmények, eszköz és eljárás ketontestek kimutatására
3 179778 4 gáló készítményt mutat be, ahol — a nitroprusszid alkalikus vizes közegben való instabilitása miatt — a nitroprusszidot elkülönítve tartják. Az elkülönítést egy kétlépéses megoldással érik el, amelynek során a nitroprusszidot először savas vizes közegben viszik 5 fel a vivőanyagra, így megőrzik a vegyület stabilitását, és szárítás után a vivőanyagot szerves bázisok, így különböző aminok vagy aminoalkoholok nem vizes oldatába mártják a szükséges lúgosság elérése érdekében. 10 A 3,212,855 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás egy javított kétbemártós készítményt ismertet, ahol egy szivacsos vivőanyagot először valamely alkalikus pufferoldattal és aminosavval impregnálnak, majd szárítás után másodszor nitroprusszid- 15 alkálifémmel, egy szerves filmképző savas pH-jú vegyülettel és egy szerves oldószerrel itatnak át. A 3,880.590 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás egybemártós úton készített ketontest-meghatározó szalagot ír le. A készítmény egy 20 nitroprusszidsó és 5-nél nagyobb fajsúlyú nehézfém, így nikkel, réz, kobalt, mangán, króm és cink sójának a kombinációja savas pH-nál való meghatározáshoz. Más 5-nél nagyobb fajsúlyú fémekként az arzén (5, 7), az ólom (11, 34) és a higany (13, 6) jöhet számításba. 25 Olyan anyagok, így pufferek, amelyek a készítményt alkalikus pH-n tartják, ki vannak zárva. Nehézségek merültek fel nehézfémeknek ketontestek kimutatásában történő használata terén. A hatóságok széles körű vizsgálatot végeztek a nagy faj- 30 súlyú fémek, így a nikkel, kobalt és a króm toxicitását illetően. Nevezetesen Christensen, H. E., a Registry of Toxic Effects of Chemical Substances, US Department of Health, Education and Welfare (HEW), Rockwille, Maryland (1975) irodalmi helyen beszámolt 35 e fémek és bizonyos sóik mérgező voltáról. A HEW tanulmány például 26 mg/kg dosis lethalis 50 (LD50) értéket ad meg nikkelklorid esetében intraperitoneálisan egérnek befecskendezve. A legkisebb megadott lethalis dózis (LDlo) 10 mg/kg kutyának intravénásán történő 40 beadásnál. Az LDlo az inhalálás kivételével bármilyen úton bármely meghatározott időszakasz alatt beadott legkisebb anyagmennyiség és amelyről azt állítják, hogy halált okozott. Az LD50 nagysága réz(II)kloridra (kupriklorid) 140 mg/kg patkánynak orálisan beadva. 45 Az LD50 nagysága intraperitoneálisan egérnek beadva 7400 ug/kg. A kobalt(II)klorid toxicitására orális beadásnál 80 mg/kg, intravénás beadás esetén pedig 20 mg/kg patkánynál. Ezenkívül 1976-ban a National Cancer Institute 50 (USA) a Survey of Compounds Which Have Been Tested for Carcinogenic Activity közleménye szerint a kobaltklorid, réz, nikkel és ezek egyes sói, a cink és számos sója, az ólom és más nehézfémek daganatokat okoznak állatoknál. Searle, C. D., a Chemical Car- 55 cinogens [ACS Monograph 193, Washington, American Chemical Society (1976) 327—329. oldal] munkájában arról ír, hogy a nikkelt különösen veszedelmes rákkeltő anyagnak találta. Az elmondottak alapján látható, hogy bizonyos 60 aminosavakat és nehézfémsókat használtak az acetecetsav és a nitroprusszid-nátrium közötti reakció javítására végzett kísérleteknél. Bizonyos javulások történtek ezeknek az erőfeszítéseknek az árán, de bizonyos mértékben korlátozottak ezek, és könnyen 65 belátható, hogy az említett anyagok bármelyikének a használata az egészségre nagy mértékben káros. Az is elfogadott tény, hogy a nitroprusszid-nátrium teszt alkalikus pH-nál (szemben a savas pH-val) egy „kétbemártós” módszer, ez pedig jelentős gazdaságossági tényező a teszt-szalagok előállításánál. Emellett komoly nehézségek jelentkeznek a vizes nitroprusszid-oldatok stabilitása terén, mégpedig alkalikus pH-nál, továbbá lassan vagy csak mérsékelten érzékenyen reagálnak és emellett a kromofór-komplexek bomlékonysága is fellép. A keletkező kromofórkomplexek színe viszonylag rövid időszakasz után gyorsan lebomlik és ennél fogva közvetlen leolvasást kíván a kezelő személyzettől. A találmány tárgya elsősorban egy javított teszt ketontestek kimutatására oldható nitroprusszid felhasználásával. A találmány körébe tartozik egy reagenskészítmény ketontestek meghatározására, egy kompozíció és eszköz, amelyek egészségre ártalmatlan anyagokat tartalmaznak. Közelebbről meghatározva a ketontestek kimutatására szolgáló reagenskészítmény nitroprusszidot tartalmaz, ahol a nitroprusszid stabilitása mind savas, mind alkalikus pH-n megmarad. A találmány kiterjed a ketontestek kimutatására szolgáló egybemártós eszközök előállítására is, amelyek alkalikus pH-n használhatók. A találmány szerinti reagenskészítmény és eszköz megkönryíti a ketontestek ionizációját és így megrövidíti a reakcióidőt. A találmány szerinti ketontest-meghatározó teszt biztosítja a keletkező kromofór-komplex stabilitásának a fennmr radását. A ke'ontest-meghatározó reagenskészítmény előállításánál a fent említett előnyök mellett ténylegesen csökkennek az előállítási költségek. A reagenskészítmény és eszköz fent említett előnyeit szervetlen magnézium- és kalciumsók jelenléte idézi elő. Az elmondottakon kívül a ketontest-meghatározó reagenskészítménynél és eszköznél a keletkező kromofór-komplex további stabilizációja a fent említett fémsók primer aminokkal alkotott szinergetikus kombinációjával érhető el. A találmány szerinti reagenst, reagenskészítményt, eszközt és eljárást a leírásban részletesen ismertetjük. A találmány tárgya tehát reagens ketontesteknek testfolyadékokban való kimutatására, különösen pedig olyan reagenskészítmény, amely nitroprusszidsót tartalmaz legalább egy szervetlen fémsóval, így magnézium- vagy kalciumsóval együtt. Adott esetben ezekhez legalább még egy primer amin társul. A készítmény valamely vivőanyagba, például abszorbeáló mátrixba vagy tablettába van beágyazva és így egy vizsgáló eszközt alkot. A nitroprusszidot oldatban alkalikus pH-n a fémsóval stabilizáljuk, amely egybemártós előállítást tesz lehetővé, a ketontest ionizálását fémsóval katalizáljuk, amely csökkent reakcióidőt eredményez, és a keletkező kromofór-komplexet a fémsóval stabilizáljuk, amelynek eredményeképpen a szín hosszabb ideig olvasható le megbízhatóan. A kromofór-komplexet a primer amin tovább stabilizálja. Egy előnyös változatban a készítmény oldható nitroprusszidot tartalmaz legalább egy szervetlen só-2
