179777. lajstromszámú szabadalom • Folyadékmintákban alkalmazható kisérleti eszköz, főleg diagnosztikai célokra
9 179777 10 Elkészítjük az Eastman 910 márkanevű, 2-ciano-akrilsav-metiiésztert tartalmazó ragasztó (szállítója az Eastman Kodak Company leányvállalata, az Eastman Chemical Products, Inc. Kingsport, Tennessee állam, amerikai egyesült államokbeli cég) 10 súly/o-os kloroformos oldatát, majd az Így kapott oldatot szorosan zárható üvegtartáiyban tároljuk. Ezután az alábbiakban ismertetett módon vizeletben glükóz kimutatására alkalmas kísérleti eszközt (hasonló a korábban említett Clinistíx márkanevű kísérleti eszközhöz) készítünk. Whatmann 3MM márkanevű szűrőpapírt impregnálunk a 2 981 606 és 3 154 534 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetett reagenskombináció oldatával, majd az impregnált szűrőpapírt szárítjuk. Közelebbről, az alábbi összetételű oldatot használjuk az impregnáláshoz: 1. példa Cünistix-kompozíció desztillált víz 758,1 ml 95%-os etanol 205.0 ml Carageonan Viscarin1 2.5 g polivinilpirrolidon 25.0 g FD C Blue No. 1. jelű, kék színű festék2 0.29 g o-toluidin-hidroklorid 5,0 g citromsav (vízmentes) 15,42 g nátrium-citrát 67.92 e Gantrez AN—1393 7,5 g felületaktív anyag 2,5 g glükóz-oxidáz 76,0 ml peroxidáz 0,5 g 1 Marine Colloids, Inc. amerikai egyesült államokbeli cég terméke, különböző molekulasûlyù poliszacharidok keveréke. 2 H. Kohnstamm and Co., Inc., New-York-i cég terméke. 3 Kémiai összetétele: metilvinil-éter-maleinsavanhidrid kopolimer, gyártja a GAF Corp. New-York-i cég. A szárítás után az impregnált szűrőpapír egyes darabjait újra impregnáljuk az Eastman 910 10%-os kloroformos oldatával. Más darabokat kontrollként csak kloroformmal kezelünk. Az impregnáláshoz használt üst úgy van kialakítva, hogy az impregnálandó papír szabadon tud az üstbe lépni, illetve kilépni, ugyanakkor viszont az üst le van fedve a kloroform elpárolgásának csökkentése céljából, illetve abból a célból, hogy a fölöslegben levő impregnáló oldat a papírról az üst belsejében kialakuló, oldószerben dús atmoszférába párologhasson. Miután az impregnált papírt az impregnáló fürdőből eltávolitottuk, szobahőmérsékleten 10—30 percen át 10%-nál kisebb relatív páratartalmú légkörben tároljuk az oldószer elpárologtatása céljából. Az így impregnált papírt ezután sötétben, száraz atmoszférában tároljuk, és ezt követően műanyag tartólemezre erősítjük és a szokásos reagenscsík formára vágjuk. Az Így készült csikókat azután sötét színű üvegből készült edényekben tároljuk szilikagél (vagyis nedvességet abszorbeáló anyag) jelenlétében felhasználásig. Az így készített csikókat ezután úgy értékeljük ki, hogy egyenként bemártjuk őket 3 másodpercre ismert mennyiségben glükózt [éspedig 0, 50, 100, 200 vagy 500 mg/deciliter koncentrációban] tartalmazó vizeletmintákba. A bemártás után a fölös mintát eltávolítjuk, majd a csíkokat fény vissza verés mérésére alkalmas berendezésbe helyezzük. A fényvisszaverést 680 nanométeren végezzük az idő függvényében, éspedig t = 15 másodperc (beleértve a bemártási időt is) alsó határértéktől t = 3,5 perc felső határértékig. Az alábbi I. táblázatban megadjuk az egyes időpontokban mérhető fényvisszaverési értékeket, illetve ezek változásait, valamint a végső fényvisszaverési értéket 10%-os Eastman 910 oldattal impregnált glükóz-specifikus papírra különböző glükózkoncentrációknál. A 15 másodpercnél mérhető változás a fényvisszaverésben az a változás, amely ahhoz képest mérhető, amikor a vizsgált minta nem tartalmaz glükózt. A táblázat adataiból látható, hogy 2 perc eltelte után már nem észlelhető változás a visszaverési értékekben. Ezek a végső színek vizuálisan egymástól egyértelműen megkülönböztethetők és stabilak maradnak néhány naptól néhány hétig terjedő időszakokon át, a tárolási körülményektől függően. A csak kloroformmal impregnált csíkok (vagyis a kontrollcsikok) a bemártás után 10 másodperccel igen intenzív színeket adnak, azonban a színek kifejlődése gyorsan folytatódik és 2 perc elteltével a csíkok feketék, vagyis nincs lehetőség esetükben megkülönböztetésre. I. táblázat Idő múlásával a fény vissza verés változása mintával való érintkeztetést követően ç Je lz N tJ ^ Je i R*“ 2sg, “% oui £< i ! s* ; 3* i «g— <3 ; < ■ N § < J gai £ ^ -JÀ w j JÍ w gai J gai i J jè O **- ^ ! -óv. M < , >e\ 50 , 6,8 j ; 8,51 3,5 j °,i ; 0 0 0 0 59 100 i 13,8 13,8: 5,6 j 2,0 0,1 0 0 0 43 200 '22,6 15,3 j 6,2 2,7 ! 0,7 0 0 0 31 500 30,8 15,71 6,5 i 2.7 j 0,7 0 0 0 22 *a t = 15 másodpercnél mérhető százalékos reflektancia (.'oR) = /£R(o mg°/i glükóz; ZoR(n mgVÍ glükóz) 2 a t=t másodpercnél mérhető 0<,R=<,oR(cioZa-0/oR„) 2. példa Előzetesen elkészített glükóz-specifikus reagenspapírt az 1. példában ismertetett módon Eastman 910 EM ragasztó (2-ciano-akrilsav-etilésztcr bázisú) 10"vos kloroformos oldatával — amely még 1 vegyes“^ nemionos detergenst és 0,01 vegyes% szilárd dikarbonsavat is tartalmaz oldva — impregnálunk. Az ebből az impregnált papírból készült reagenscsikok az 1. példában ismertetett csíkokéhoz hasonló jellemzőkkel rendelkeznek, sőt az elszincződött reagenscsikok különösen egyenletes külsejűek, vagyis az elszíneződés nagyon egyenletes. A mérési eredmények az 1. példában leírtakhoz hasonlóak. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
