179734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag hatásos, új N2-(1,2,3,4-tetrahidro-8-kinolil)-szulfonil L-arginin-amidok előállítására
5 179734 6 cióképcs származékát, pl. sav-halogenidjét, sav-azidját, aktivált észterét (p!. p-nitro-feni!észter) vagy szén-dioxid elegye! és egy megfelelő (ÍV) általános képletü aminosavszármazékot vagy annak reakcióképes származékát, pl. mono- vagy diszilil származékát kondenzáltatok, szűk- 5 séges esetben kondenzáló ágens, előnyösen karbodiimid (pl. 1,3-diciklohexil-karbodiimid) jelenlétében. Gyakran előnyösebb és könnyebben kivitelezhető az eljárás, ha a (IX) általános képletü N2-kinolinszulfonil-L-arginin reakcióképes származékát abban az oldatban 10 alkalmazzuk, amelyben azt előállítottuk. A kondenzáció körülményeit a szakember a technika állása alapján választhatja meg. A kiindulási anyagul szolgáló (IX) általános képletü N2-kinolinszulfonil-L-arginint előállíthatjuk oly módon, 15 hogy (II) képletü L-arginint kondenzáltatunk lényegében ekvimoláris mennyiségű (VII) általános képletü kinolinszulfonil-halogeniddel — mely képletben Xjelentése előnyösen klóratomoldószerben, bázis jelenlétében. Az így kapott (I) általános képletü N"-aril-szulfonil- 20 -L-arginin-amid elkülönítése és tisztítása ismert módon végezhető. Az elkülönítés történhet pl. a katalizátor leszűrésével és az oldószer ezt követő elpárologtatósával, a tisztítás végezhető eldörzsöléssel vagy alkalmas oldószerből, pl. dietiléter-tetrahidrofurán, dietil-éter-meta- 25 nolelegyéből, illetve vizes metanolból való átkristályosítással, továbbá szilikagélen, illetve alumíniumoxidon való kromatografálással. A fent leírt módon állíthatunk elő a (2R,4R)-4-alki!-2-piperidin-karbonsavakbóI vagy azok észtereiből (2R,4R)-l-(Nz-l,2,3,4-tetrahidro-8-ki- 30 nolinszulfonil-L-arginil)-4-alkil-2-piperidin-karbonsavakat. Már említettük, hogy a találmány szerint előállított N2-aril-szulfonil-L-arginin-amidok jellemzője a különösen nagy trombózisgátló hatás emlősökben, lényegileg 35 mérgező hatás nélkül; éppen ezért ezek a hatóanyagok egyaránt alkalmazhatók diagnosztikai reagensként trombociták vérben való jelenlétének meghatározására és/vagy gyógyszerként a trombózis megfékezésére, illetve megelőzésére. 40 A találmány szerint előállított hatóanyagok a trombocita aggregáció inhibitoraként alkalmazhatók. A találmány szerint előállított N2-aril-szulfonil-L-arginin-amidok trombózisgátló hatását összehasonlítottuk ismert trombőzisgátlő hatóanyagéval, az N2-(p-tolil- 45 -szulfonil)-L-arginin-metilészter hatásával, meghatározva a fibrinogén koagulációs idejét. A fibrinogen koagulációs idejét a következőképpen mértük. 150 mg szarvasmarha fibrinogént (Cohn frakció I; Armour Inc. cég) feloldottuk 40 ml bórsav-só pufTenoJ- datban (pH-=7,4), s a kapott fibrinogénöldat 0,8 ml-nyi mennyiségéhez adagoltunk 0,1 ml tiszta bórsav-só pufi feroldatot (ellenőrzés) (pH=7,4) vagy hatóanvagojdat mintát tartalmazó bórsav-só pufferoldatot, majd ezen oldatok elegyéhez 0,1 ml trombinoldatot (5 çgység/ml; Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. cég) adagoltunk jeges-vizes fürdőben. A reakcióelegyet közvetlenül az összekeverés után a jeges fürdőből áthelyeztük 25 :C hőmérsékletű fürdőbe. Koagulációs időként a 25 °C hőmérsékletű, fürdőbe való áthelyezés időpontja és az első fibrinszálak megjelenésének időpontja közötti időtartamot határoztuk meg. Amikor a hatóanyag nélküli pufferoldatot adagoltuk, a koagulációs idő 50—55 másodperc tartományon belül volt. A kísérleti eredményeket az 1. táblázat foglalja össze. Bevezettük az „a koagulációs idő kétszereződéséhez szükséges koncentráció” fogalmát, melyen egy hatóanyag azon koncentrációját értjük, mely mellett a koagulációs idő a normális 50—55 másodpercről 100—110 másodpercre hosszabbodik.. . Az ismert trombózisgátló hatóanyagnál, az N2-(p-toli5-szulfonil)-L-arginin-metilészternéi ;a- koagulációs idő kétszereződéséhez szükséges koncentráció 1100 jzm értéknek adódott. ' ' A kísérletek során mintaként alkalmazott — a találmány szerint előállított — különböző inhibitorokat az 1. táblázatban az (I) általános képletben szereplő R és Ar csoportok esetenkénti konkrét jelentésének megadásával azonosítjuk. Amikor a találmány szerinti eljárással előállított N2- -aril-szulfonil-L-arginin-amidot tartalmazó oldatot adtunk be — intravénásán — állatoknak, a keringő vérben a nagyfokú antitrombotikus hatás 1—3 órán át fennmaradt. ; A találmány szerint előállított antitrombotikus vegyületeknek a vérben való elbomlását jellemző felezési időtartam mintegy 60 percnek bizonyult ; a kísérleti állatok (patkányok, nyulak, kutyák és csimpánzok) fiziológiai állapota nem romlott. Az állatkísérletek során trombin-infúzióval előidézett fibringén-csökkenést a találmány szerint előállított hatóanyag egyidejű infúziója kielégítő mértékben meggátolta. Az (I) általános képletü hatóanyagok intravénás beadása alkalmával egereknél (hím, 20 g) testsúlykilogrammonkénti 100—500 mg közötti LD50 értékeket mértünk. 2. táblázat Reprezentatív LO50-értékek l-[N2-)l,2,3,4-tetrahidro-8-kinolinszulfonü)-L-arginiI]-4-metil-2-piperidin-karbonsav 191 mg/tests.kg l-[N2-(3-metil-l,2,3,4-tetrahidro-8-kinolinszulfonil)-L-arginil]-4-metiI-2--piperidin-karbonsav 264 mg/tests.kg l-[N2-(3-etil-1,2,3,4-tetrahidro-8-kinolinszulfo'ni!)-L-argmil]-4-metil-2--piperidin-karbonsav 322 mg/tests.kg l-[N2-(l,2,3,4-tetrahidro-8-kinolinszulfonil)-L-arginil-4-eti!-2-piperidin-karbonsav 132 mg/tests.kg (2R,4R)-l-[N2-(3-metil-l,2,3,4-tetrahidro-8-kinolinszulfonil)-L -arginil]-4-metil-2- -piperidin-karbonsav 210 mg/tests.kg 3
