179726. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sejtfalvázat tartalmazó szilárd gyógyszerkészítmények előállítására
11 179726 12 a Átlagos bőrreakció (induráció, átmérő mm-ben) ± standard hiba. ’Az alábbi példákban használt Nocardia rubra-SFV-et a következőképpen állítjuk elő: A Nocardia rubra-t polipeptont (2%) és élesztő- 5 kivonatot (1%) (pH 7,0) tartalmazó táptalajon 30 °C-on 3 napig tenyésztjük és a fermentlevet (18 liter) leszűrjük. A nedves micéliumot (körülbelül 400 g) vízben (1 liter) szuszpendáljuk és „Dynomil”-lal (0,1—0,2 mm gyöngyök ; 3000 fordulat per perc ; 2 liter per óra) háromszor 10 megőröljük. A kapott anyagot pufferezzük (pH 7,5), ribonukleázza] és dezoxiribonukleázzal 30 percig kezeljük, majd centrifugáljuk (800 xg, 15 perc). A felülúszót elválasztjuk és tovább centrifugáljuk (10 000—20 000 x g, 30 perc). A csapadékokat összegyűjtjük, acetonban 15 (1 liter) szuszpendáljuk és 24 óráig keverjük. A csapadékokat szűréssel összegyűjtjük, 2% Triton X—100-ban (1 liter) szuszpendáljuk, 24 óráig keverjük, majd centrifugáljuk (lOOdÖ—20 000xg, 30 perc). A csapadékokat á fenti módon újra Triton X—100-zal kezeljük. A ka- 20 pott üledékeket egyszer etanol—víz (1: 1) elegyével (1 liter), majd kétszer vízzel (1 liter) mossuk és centrifugáljuk (10 000—20 000 x g, 30 perc). A csapadékokat veronál-pufferben (pH 9,5) szuszpendáljuk, szobahőmérsékleten 24 óráig keverve pronázzal (50 mg) kezel- 25 jtik, majd centrifugáljuk (10 000—20 000xg, 30 perc). Áz üledékeket háromszor vízzel (1 liter) mossuk és centrifugáljuk (10 000—20 000xg, 30 perc). Az üledékeket dietil-éter—etanol (1: 1) elegyével (1 liter) mossuk, csökkentett nyomáson szobahőmérsékleten 3 napig 30 szárítjuk, elporítjuk és átszitáljuk (125 jjl). Körülbelül 7 g finom N. rubra-SFV port kapunk. A találmány szerinti szilárd készítményt steril vízben újraszuszpendáljuk és a betegeknek intráperitoneálisan, intralézionálisan, intradermálisan, szubkután, intra- 35 muszkulárisan vagy intrapleurálisan adjuk be 10—2000 Jjtg, előnyösen 100—300 p.g SFV-t tartalmazó egyszeri dózis formájában. A következő példákban részletesebben ismertetjük a találmányt. 1. példa. -N. rubra-SFV 4 mg Miglyol 2 csepp O, 2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os mannitoldat 1 ml Az N. rubra-SFV-t (140 mg) teflon-dugattyúval ellátott szövethomogenizátorba (Takashima Shoten Co., Ltd., Japán) tesszük. 27-es számú injekcióstűvel felszerelt fecskendőből miglyolt (70 csepp) adunk az SFV- hez és a keveréket sima péppé homogenizáljuk (1000 fordulat per perc). Ezután 0,2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os vizes mannit-oldatot (35 ml) adunk a péphez és a homogenizálást folytatva N. rubra-SFV-hez kötött, kis olajcseppecskékből álló egyenletes szuszpenziót kapunk. Liofilizált anyag előállítása céljából az N. rubra-SFV olajhoz kötött szuszpenzióját 35 fiolába (10 ml térfogat) visszük át, folyékony nitrogén segítségével gyorsan lefagyasztjuk, majd szobahőmérsékleten liofilizáljuk A liofilizált anyaghoz a felhasználás előtt 1 ml sterilizált vizet adva szuszpenziót állítunk elő. 2. példa N. rubra-SFV 4 mg Drakeol 6VR 2 csepp O, 2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os mannitoldat 1 ml Az 1. példában használt miglyol helyett Drakeol 6VR-t alkalmazunk és a kveréket az 1. példában leírt módon kezelve szilárd készítményt kapunk. 3. példa N. rubra-SFV 4 mg Szkvalén 2 csepp O, 2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os mannitoldat 1 ml Az 1. példában használt miglyol helyett szkvalént alkalmazunk és a keveréket az 1. példában leírt módon kezelve szilárd készítményt kapunk. 4. példa N. rubra-SFV 4 mg A-vitamin-palmitát 2 csepp O, 2% Tween—80-at tartalmazó 5,6%-os mannitoldat 1 ml Az 1. példában használt miglyol helyett A-vftamin-palmitátot alkalmazunk és a keveréket az 1. példában leírt módon kezelve szilárd készítményt kapunk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás előnyösen szilárd gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy 0,1—10 súlyrész adjuváns és tumorellenes hatású mikrobiális sejtfalvázat, 40 előnyösen valamely Nocardia, Mycobacterium, Corynebacterium vagy Arthrobacter genusba tartozó mikroorganizmus sejtfalvázát, 0,2—20 súlyrész vivőolajat, előnyösen szkvalánt, szkvalént vagy A-vitamin-palmitátot, 0,05—5 súlyrész szuszpendálószert, adott esetben 45 valamely polialkohol-észtert, így polioxietilén-szorbitán-észtert és 5—100 súlyrész diszpergálószert, előnyösen valamely cukoralkoholt összekeverünk, és kívánt esetben a kapott szuszpenziót liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási mód- 50 ja azzal jellemezve, hogy vivőolajként állati, növényi, ásványi vagy félszintetikus olajat használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy valamely cukrot használunk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja 55 azzal jellemezve, hogy mannitot, szorbitot vagy glükózt használunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy Nocardia rubra sejtfalvázat, szkvalént, polioxietilén-szorbitán monooleátot és man-60 nitot használunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84.587.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelőt vezető: Benkő István igazgató
