179677. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(omega-amino-alfa-hidroxi-alkanoil)-kanamicin-származékok előállítására
19 179677 20 Az !.. példában leírt módon előállított poli(trimetil-szilíl)-6'-N-Cbz-Kana A-t [5,454 g, 4,97 millimól 6'-Cbz-Kana A (szilil)9-ként számítva] feloldunk 50 ml vízmentes (molekulaszitával szárított) tetrahidrofuránban 23°-on. 20 perc alatt, keverés közben hozzáadjuk a fenti A) pontban előállított vegyes anhidrid felét (10,0 millimól) és a keveréket 1 hétig tovább keverjük. Ezután vizet (100 ml) adunk a reakciókeverékhez és a pH-t 3M kénsavoldattal 2,0-re állítjuk be. A keverést 1 óráig folytatjuk és az oldatot etil-acetáttal extraháljuk. A poliszililezett anyag kikristályosodása után a reakciókeveréket leszűrjük. Foszfor-pentaoxid felett megszárítva a kapott szilárd anyag súlya 0,702 g. A reakciókeveréket tovább extraháljuk összesen 4 x 75 ml etil-acetáttal, majd az etil-acetát-felesleget a vizes fázisból ledesztilláljuk. A vizes oldatból vett mintán HPLC-elemzést végzünk. A kapott görbe a di-Cbz-amikacin 26,4%-os kitermelését mutatja. A vizes réteget ezután Parr-készülékben 3,5 kg/cm2 nyomáson 24 óráig hidrogénezzük 0,5 g 10% Pd/C katalizátor jelenlétében. Az anyagot leszűrjük és az egyesített szűrletet és mosófolyadékokat E. colival szemben vizsgálva az amikacin 31,2%-os kitermelését állapítjuk meg. Az amikacin/BB—K29 arány körülbelül 9—10: 1; nyomokban poliacilezett termék és nem reagált Kana Ajelenléte mutatható ki. ;*i :é 8. példa Víz hatása amikacinnak poli(trimetil-szilil)-Kana A acilezésével történő előállítására acetonos oldatban, 23°-on A) Vízmentes oldószer A 3. példában előállított poli(trimetil-szilil)-Kana A-t [2,40 g, 2,0 millimól, Kana A (szilil)|0-ként számítva] molekulaszitával szárított 20 ml acetonban oldunk. Az oldatot 23~-on keverjük és molekulaszitával szárított 10 ml acetonban oldott SAE-t (0,701 g, 2,0 millimól) adunk hozzá 10 másodperc alatt. A keverést 23°-on 22 óráig folytatjuk. Vizet (50 ml) adunk hozzá és a pH-t (7,5) 2,5-re állítjuk be. Az acetont vákuumban 40°-on lehajtjuk és a vizes oldatot 3,57 kg/cm2 H2-nyomásnál 23°-on 2 óráig redukáljuk 1,0 g 10% Pd/C katalizátor jelenlétében. A mikrobiológiai próba 31,24% amikacinkitermelést jelent. B) Az oldószerhez adott víz Megismételjük a fenti A) műveletet, azzal a különbséggel, hogy 1,0 ml (56 millimól) vizet adunk a poli(trimetil-szilil)-Kana A oldathoz, és a SAE-val való acilezés előtt 15 percig keverjük. Mikrobiológiai próbával 33,80% amikacin-kitermelést mutatunk ki. 9 9. példa Amikacin előállítása poli(trimetil-szilil)-6'-N-Cbz-Kana A acilezésével acetonban, BHBA és izobutil-karbonsav vegyes anhidridje segítségével A) Vegyes anhidrid előállítása BHBA-t (1,267 g, 5,0 millimól) és N-trimetil-szilil-acetamidot (MSA) (1,313 g, 10,0 millimól) molekulaszitával szárított 20 ml acetonban 23 -on keverjük és trietil-amint (TEA) (0,70 ml, 5,0 millimól) adunk hozzá. A keveréket visszafolyatás közben, nitrogénatmoszférában 2,5 óráig forraljuk. A keveréket lehűtjük —20°-ra és izobutil-klór-formiátot (0,751 g, 0,713 ml, 5,50 millimól) adunk hozzá. A trietil-amin-hidroklorid azonnal kiválik. A keveréket 1 óráig — 20°-on keverjük. B) Acilezés Az 1. példában előállított poli(trimetil-szilil)-6'-N-Cbz-Kana A-t (6,215 g, 4,9 millimól (szilil)9 vegyületként számítva] keverés közben, 23°-on feloldjuk molekulaszitával szárított 20 ml acetonban. Az oldatot lehűtjük — 20°-ra és a fenti A) pontban előállított, —20°-ra lehűtött vegyes anhidridoldatot lassan, 30 perc alatt hozzáadjuk. A reakciókeveréket még 1,5 óráig — 20°-on és 17 óráig 23°-on keverjük. Utána a reakciókeveréket 23°-on, keverés közben 150 ml vízbe öntjük, a pH-t 3n sósavoldattal 2,5-re állítjuk be és a keverést 15 percig folytatjuk. Az acetont 40°-on vákuumban lepároljuk. A vizes oldat alikvotjából HPLC-elemzést végzünk. A kapott görbe alapján a di-Cbz-amikacin kitermelése 34,33%. A vizes oldat nagy részét 3,5 kg/cm2 H2-nyomáson, 23°-on, 3V4 óráig redukáljuk 2,0 g Pd/C katalizátor jelenlétében. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az egyesített szűrlet és mosófolyadék E. colival szemben végzett mikrobiológiai próbája alapján az amikacin kitermelése 35,0%. 10. példa Amikacin előállítása poIi(trimetii-szilil)-6'-N-Cbz-Kana A acilezésével 3-pentanonban Az 1. példa szerint előállított poli(trimetil-szilil)-6'-N-Cbz-Kana A-t [30 g, 23,65 millimól, 6'-N-Cbz-Kana A (szilil)9-ként számítva] molekulaszitával szárított 100 ml 3-pentanonban oldva 23°-on keverünk és NAE-t (26,02 millimól, 10% felesleg) adunk hozzá 40 perc alatt. A keverést 23"-on 113 óráig folytatjuk, majd a keveréket élénk keverés közben 250 ml vízhez adjuk. A pH-t (7,3) 3n sósavoldattal 2,5-re állítjuk be, a keveréket még 30 percig keverjük és a pentanont vákuumban 40°-on lepároljuk. A vizes oldatot 4x100 ml etil-acetáttal extraháljuk. A vizes oldat alikvotjából HPLC-elemzést végzünk. A kapott görbe 46,12% di-Cbz-amikacin-kitermeiésre utal. A \ izes reakciókeverék nagy részét 3,57 kg/cm2 H2- nyomáson, 23=-on, 2l/2 óráig redukáljuk 3,0 g 10% Pd/C katalizátor jelenlétében. Az egyesített szűrlet és mosófolyadék mikrobiológiai vizsgálata 40,24% amikacin-kitermelést mutat ki. A redukált vizes reakciókeverék főrészét vákuumban 40°-on körülbelül 100 ml térfogatra bepároljuk és CG—50 (NH4+) ioncserélő oszlopon (10 cm x 1,2 m, körülbelül 10 liter gyantát tartalmaz) frakcionáljuk. A vizes oldatot felvisszük az oszlopra, az oszlopot 5 liter vízzel mossuk, az anyagot 0,5n ammónium-hidroxiddal eluáljuk (majd 3n am-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
