179663. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D-alfa-aminosavak előállítására
11 179663 12 5 ml 0,1 mólos foszfátpuffert (pH = 8,0), amely 1 g/dl DL-p-hidroxifenil-hidantoint és 5 g/dl fent említett sejtet tartalmaz, 16 órán át tartunk 30 °C-on. Az egyes reakcióelegyekben talált D-p-hidroxifenilglicin mennyiségét az 5. táblázatban közöljük. 5 5. táblázat A tápközeghez adott 5-szubsztit uált hidantoín A kapott D-p-hidroxifenilgticin mennyisége (mg/ml) 0,92 hidantoin 0,98 DL-5-metil-hidantoin 1,72 DL-5-izopropil-hidantoin 2,35 DL-5-izobutil-hidanîoin 2,04 DL-5-(l '-metilpropil)-hidantoin 1,82 DL-5-hidroximetil-hidantoin 1,96 DL-5-(l '-hidroxietil)-hidantoin 2,31 DL-5-metilmerkaptoetil-hidantoin 5,21 DL-5-karbamoilmetil-hidantoin 1,99 DL-5-karbamoiletil-hidantoin 2,16 DL-5-benzil-hidantoin 3,99 DL-5-(p-hidroxibenzil)-hidantoin 2,04 DL-5-indolilmetil-hidantoin 5,06 DL-5-(5'-hidroxiindoli!metil)-hidantoin 2,03 DL-5-karboximetil-hidantoin 1,92 DL-5-karboxietil-hidantoin 1,78 DL-5-(4'-imidazolilmeti!)-hídantoín 1,72 DL-5-(4'-aminobutil)-hidantoin 1,99 DL-5-(3'-guanidopropil)-hidantoin 2,03 DL-5-(3'-aminopropil)-hidantoin 1,92 DL-5-(3'-ureidopropil)-hidantoin 1,70 DL-5-(3'-szulfhidriletil)-hidantoin 2,06 DL-5-fenil-hidantoin 3,99 DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoin 4,72 DL-5-(p-klórfenil)-hidantoin 4,19 DL-5-(p-metilfenil)-hidantoin 4,00 DL-5-(p-metoxifenil)-hidantoin 4,92 DL-5-(p-benziloxifenil)-hidantoin 2,42 A tápközeghez adott 5-szubsztituáIt hidantoin A kapott D-p-hidroxifeniíglicin mennyisége (mg/ml) DL-5-(3 ',4'-dihidroxibenzil)-hidantoin 2,88 DL-5-(3',4'-dimetoxibenzil)-hidantoin 2,46 DL-5-(3',4'-metiléndioxi)-hidantoin 2,72 DL-5-cianoetil-hidantoin 5,42 12. példa Egy deciliterenként 2 g glükózt, 0,5 g ammóniumszulfáíot, 0,1 g káliumdihidrogénfoszfátot, 0,02 g kalciumklorid-dihidrátot, 0,3 g dikálium-hidrogénfoszfátot, 0,05 g magnéziumszulfát heptahidrátot, 1 mg ferroszulfát heptahidrátot, 1 mg mangánszulfát tetrahidrátot és 1,0 g élesztőkivonatot tartalmazó tápközeg pH-ját 7,0-ra állítjuk be. A tápközeg két, egyenként 300 ml-es részletét 1 literes fermentorokba helyezzük. A fermentorokat 15 percig melegítjük 120 °C-on sterilizálás végett. Előzetesen 30 C-on 24 órán át tenyésztett Moraxella nonliquefaciens AJ 11 221 és Pseudomonas caryophylli AJ 11 150 törzs kultúrájának 6 ml-es mintáit átvisszük a fermenter okba. A tenyésztést aerob körülmények között 30 °C-on folytatjuk és a pH-t 7,0-ra állítjuk gáz alakú ammóniával. 16 óra, illetve 22 óra tenyésztés után 0,2 g/dl koncentráció eléréséig DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoint adunk a tápközeghez. A tenyésztés kezdetétől számított 25 óra eltelte után a fermentorokba nitrogéngázt vezetünk, és a fermentlét 40 °C-ra melegítjük fel. Ezután 3 g/dl-re növeljük a DL-5-(p-hidroxifenil)-hidantoin koncentrációját kristályos vegyület hozzáadásával. A tápközegeket 40 órán át 40 °C-on tartjuk, miközben a fermentorokba folyamatosan nitrogéngázt vezetünk. A pH-t n sósavval 7,0-ra állítjuk be. Az AJ 11 221 jelű törzzsel 2,75 g/dl, az AJ 11 150 jelű törzzsel 2,69 g/dl D-p-hidroxifeniiglicint tartalmazó reakcióelegyet állítunk elő. 1. táblázat kiindulási 5-szubsztituált-hídantoin kapott D-alfa-aminosav A kapott D-alfa-amin osa vak mennyisége, (mg/dl) AJ 11 150 AJ 11 149 AJ 11 151 AJ 11 152 DL-5-metil-hidantoin D-alanin 2,16 1,31 2,24 0,52 DL-5-izopropiI-hidantoin D-valín 0,70 0,56 0,70 0,58 DL-5-izobutil-hidantoin D-leucin 0,56 0,42 0,48 0,41 DL-5-(l '-metilpropil)-hídantoin D-izoleucin 1,21 0,87 1,12 0,34 DL-5-hidroximetil-hidantoin D-szerin 3,91 3,77 3,86 2,86 DL-5-0 '-hidroxietil)-hidantoin D-treain 2,82 2,58 2,93 1,99 DL-5-szul f hidrilmetil-hidantoin D-cisztein 4- D-cisztin 4,84 4,61 5,10 3,29 DL-5-metilmerkaptoetiI-hidantoin D-metionin 5,38 4,93 5,72 3,23 DL-5-karbamoilmetiI-hidantoin D-aszparagin 4,82 4,02 4,47 3,84 DL-5-karbamoiletil-hidantion D-glutamin 4,26 3,91 4,35 3,64 DL-5-benzil-hidantoin D-fenilalanin 2,86 2,58 3,81 2,22 DL-5-(p-hidroxibenzil)-hidantoin D-tirozin 2,02 2,52 3,91 2,09 DL-5-indolilmetil-hidantoin D-triptofán 1,86 1,67 2,04 1,23 DL-5-(5'-hidroxiindo!ilmetil)-hidantoin D-5-hidroxitriptofán 0,92 0,76 0,91 0,82 DL-5-karboximetil-hidantoin D-aszparaginsav 0,62 0,46 1,39 0,48 DL-5-karboxietil-hidanto in D-glutaminsav 0,56 0,37 1,20 0,34 DL-5-(4'-imidazoilnietil)-hidantoin D-hisztidin 2,05 1,76 2,24 1,72 6
