179657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eszterasztin és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
3 179657 4 1260, 1225, 1185, 1115, 1040, 1020, 975, 920, 900, 880, 840, 810 és 690 cm-1-nél mutat jellegzetes abszorpciós sávokat (KBr) és gj a mágneses magrezonancia abszorpciós spektrumát a 3. ábra mutatja a csatolt rajzokon. A találmány szerint az eszterasztint úgy állítjuk elő, hogy a Streptomyces genus eszterasztin termelő törzsét aerob körülmények mellett megfelelő kultúrtáptalajon tenyésztjük, a táptalaj asszimilálható szén és nitrogénforrást tartalmaz és a tenyésztést addig végezzük, amíg a táptalajban eszterasztin halmozódik fel, amelyet a tenyészetből izolálunk. Az eszterasztin termelő törzs, például az előbb említett Streptomyces MD4—Cl lehet. Az MD4—Cl törzset 1976. szeptember 25-én deponáltuk FERM—P 3723 számon a „Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology” Inage, Chiba-City, Japán, hiteles deponálóhelyen. Ezt a törzset deponáltuk az American Type Culture Maryland amerikai egyesült államokbeli deponálóhelyen is 1977. szeptember 20-án ATCC 31 336 számon. Az MD4—Cl törzs tenyésztési és taxonómiai tulajdonságait az alábbiakban írjuk le. 1. Mikroszkopikus morfológia Az MD4—Cl törzs elágazó micéliumokat tartalmaz, amelyekből lég-hifák fejlődnek nyílt spirálok formájában. Elágazó örvképződést nem észleltünk. A fejlett spóraláncok rendszerint több mint 10 kónikus spórát tartalmaznak. A spórák mérete rendszerint 0,6—0,8- szor 0,8—1,2 mikron és sima felületűek. 2. A növekmények jellezői különböző táptalajokon Az alább közölt színek a „Color Harmony Manual” Container Corporation of America által kiadott kézikönyv színskálájának felelnek meg. 1. Szacharóz-nitrát agar (27 °C-on inkubálva): színtelen növekmény, amely szürkéspiros—pirosas szürke léghifákat hordoz (6ge, Rose Gray) (5ge, Rosewood). Oldható pigmentet nem észleltünk. 2. Glükóz-aszparagin agar (27 °C-on inkubálva): Színtelen növekmény, amely világos pirosas barna (5 ec, Dusty Peach) színűtől egészen világos barnásszürkéig terjedő színű léghifákat tartalmaz (3 fe, Silver Gray). Oldható pigmentet nem észleltünk. 3. Glicerin-aszparagin agar (ISP 5. sz. táptalaj, 27 °C-on inkubálva) : színtelen világossárga növekmény, amely fehértől rózsaszínes fehér színig terjedő léghifákat hordoz az inkubáció után 14 nappal. Oldható pigmentet nem észleltünk. 4. Keményítő-szervetlen sók agar (ISP. 4. táptalaj, 27 °C-on inkubálva): színtelen növekmény, amely fényes barnásszürkétől (3 fe, Silver Gray) rózsaszínes szürke színig terjedő léghifákat hordoz. Oldható pigmentet nem észleltünk. 5. Tirozin agar (ISP. 7. sz. táptalaj, 27 °C-on inkubálva): világos sárga növekmény rózsaszínes fehér— pirosas szürke (5 ge Rosewood). Oldható pigmentet nem észleltünk. 6. Tápagar (27 °C-on inkybálva): világos sárga növekmény. Se lég-hifák nem képződnek, sem pedig oldható pigmentet nem észleltünk. 7. Élesztő kivonat — maláta kivonat agar (ISP. 2. sz. táptalaj, 27 °C-on inkubálva): világos ^sárgásbarna— sárgásbarna növekmény, amely .világos barnásszürke—rózsaszínes szürke (7 ig, Rosa Taupe) színig terjedő lég-hifákat tartalmaz. Oldható pigmentet nem találtunk. 8. Zabliszt agar (ISP. 3. sz. táptalaj, 27 °C-on inkubálva): színtelentől a világos sárga vagy fakó sárga színig terjedő növekmény, amely szürkés piros (6 ge, Rose Gray)—pirosas szürke (5 ge, Rosewood—5 ig, Rose Taupe) színű lég-hifákat hordoz. Oldható pigmentet nem észleltünk. 9. Glicerin-nitrát agar (27 °C-on inkubálva): világos sárga—világos sárgásbarna (3 ie, Camel—4 ie, Cork Tan) növekmény, rajta fehér, barnásfehér színű lég-hifák. 10. Keményítő agar (27 °C-on inkubálva): színtelen növekmény, amelyen barnásfehér—világos barnásszürke (5 de, Pussywillow Gray) lég-hifák vannak, 11. Kalcium-maláta agar (27 °C-on inkubálva): színtelen növekmény, amely fehér, halvány pirosasbarna színű (5 ec, Dusty Peach (-tói pirosas szürke), (5 ge. Rosewood) lég-hifákat hordoz. Oldható pigmentet nem észleltünk. 12. Cellulóz (27 °C-on inkubálva): a növekmény színtelen. Sem lég-hifák, sem pedig oldható pigment nem képződik. 13. Zselatin darabok: sima zselatin táptalaj, amelyet 20 °C-on inkubáltunk, a növekmény színtelen és a fejlődő lég-hifák fehér színűek és barna színű oldható pigmentet termelnek. Glükóz-pepton-zselatin táptalaj (27 °C-on inkubáltuk), világos sárga—világos sárgásbarna növekmény mérsékelten fejlődő fehér színű lég-hifákkal és sötétbarna színű oldható pigmentet termel. 14. Fölözött tej (37 °C-on inkubálva): színtelenvilágos sárgás növekmény, amely fehér színű enyhén fejlett léghifákat hordoz és az. oldható pigment az inkubáció 19. napjától kezdve halványan barnul. 3. Fiziológiai tulajdonságok 1. Tenyésztés hőmérséklete Keményítő-élesztő agaron kapott tenyészetet (összetétel 1,0% oldható keményítő, 0,2% élesztő extraktum és 3% agar, pH=7,0—7,2/20 °C-on, 24 °C-on, 27 °C-on, 30 °C-on, 37 °C-on és 50 °C-on vizsgáltunk. Az MD4—Cl törzs minden vizsgált hőmérsékleten nőtt, kivéve 50 °C-on. A tenyésztés "optimális hőmérsékletének 27—37 °C bizonyult. 2. Zselatin cseppfolyósítása 15%-os sima zselatin táptalaj 20 °C-on történő inkubáció hatására nem cseppfolyósodott el. 15% zselatin az inkubáció 5. napján elkezdett cseppfolyósodni, 27 °C-on végzett inkubáció esetén glükóz-pepton táptalajon és a cseppfolyósodás mértéke közepes — gyenge. 3. Keményítő hidrolízise A keményítőt szervetlen sók-keményítő agar táptalajban és keményítő-agar táptalajban az inkubáció 5. napjától kezdődően hidrolizáltuk és a hidrolízis foka közepes. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
