179599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 P-4 antibiotikum előállítására
179599 4 tikum”-ként vagy röviden „P-4”-ként fogjuk nevezni. C-15003 antibiotikumot termelő mikroorganizmustörzsre példaképpen a C-15003 actinomycetes-törzset — amelyet egyszerűen C—15003 törzsként fogunk említeni nevezzük meg. Ez a törzs a talajból és más mintákból lett izolálva antibiotikumokat termelő mikroorganizmusok elkülönítésére végzett kísérletek során. A C—15003 törzs mikrobiológiai jellemzőit a Schirling és Gottlieb által ajánlott módszerekkel [International Journal of Systematic Bacterology, 16, 313—340 (1966)1 analóg módszerek alkalmazásával állapítottuk meg. A 28 °C-on 21 napon át végzett megfigyelések eredményei az alábbiak: 1. Morfológiai jellemzők A vegetatív micélium jól fejlődik és ágakat növeszt mind agar-agaron, mind folyékony közegben. A legtöbb hifa átmérője 0,8-1,2 fim, és bizonyos esetekben a hifák olyan fragmensekre bontódhatnak, amelyek rúd alakú baktériumokra vagy rövid, elágazó hifákra emlékeztetnek. A törzs jól növekszik különböző taxonómiai táptalajokon, a vegetatív micélium fölé légmicéiium rakódik, bár az utóbbi gyakran korémia-szerű alakzatokat képez (ezek mérete 50—200 200—1000 /am), amelyeken további aeriális iazaz levegőn végbemenő) növekedés megy végbe. A légmicéliuinok legtöbbje kacskaringós, egyenes vagy laza spirálszerű, csak néhányszor összekapcsolódva egymással. Kifejlett tenyészetek mikroszkóppal végzett vizsgálata alapján megállapítható, hogy csak néhány esetben alkotnak a konídiumszerű sejtek láncot, ugyanakkor az ilyen tenyészetek felületéről vett sejtszuszpenziókban mikroszkóp alatt számos, megnyúlt ellipszoid-szerű alakzat (mérete: 0,8— 1,2 fim • 4.8- -6,8 fim), illetve arthrospórákra emlékeztető, ellipszoid-szerű alakzat (mérete: 0,8-1,2 fim *1,0 — 2,0 fim) figyelhető meg. Elektronmikroszkóppal végzett vizsgálatok tanúsága szerint ezeknek az alakzatoknak sima a felülete. 2. A sejteket alkotó komponensek A törzset rázatásos tenyésztésnek vetjük alá módosított ISP No.l. jelzésű táptalajon 28 °C-on 66-90 órán át, majd a tenyésztést követően a sejteket elkülönítjük és átöblítjük. Ezután Becker, B. és munkatársai módszerével [Applied Microbiology, 12, 421 (1964)], illetve Lechevalier, M. P. módszerével [Journal of Laboratory and Clinical Medicine, 71, 934 (1968)] a teljes sejteket vizsgálatnak vetjük alá a diamino-pímelinsav kimutatása, illetve a bennük levő cukrok azonosítása céljából. A diamino-pimelinsav mezo-formában megtalálható a sejtekben, ugyanakkor galaktóznak és arabinóznak megfelelő nyomokat is azonosítottunk. 3. Taxonómiai táptalajokon mutatott jellemzők A törzs viszonylag jól növekszik különböző táptalajokon, a vegetatív micélium a tenyésztés kezdeti szakaszaiban színtelen és halványsárga közötti színárnyalatú, míg a későbbi szakaszokban halvány sárgásbarna .1 és sárgásbarna közötti árnyalatú. A törzs sárga és sárgásbarna közötti színű oldható pigmentet termel különböző taxonómiai táptalajokon. A légmicéiium porszerű és rendszerint csak mérsékelten növekszik, színárnyalata pedig a fehér és sárga vagy halvány sárgásbarna között változik. A törzs különböző taxonómiai táptalajokon mutatott jellemzőit az 1. táblázatban foglaljuk össze. 1. táblázat A C—15003 törzs jellemzői taxonómiai táptalajokon (A) szacharóz-nitrát agar: növekedés (G): közepes, élénk, sárgadinnye (3 ia)1 és sárgásbarna (3 le)1 közötti színű, korémiára emlékeztető alakzatok képződnek légmicéiium (AM): gyér, fehér oldható pigment (SP): nincs vagy halvány sárgásbarna (B) glicerin-nitrát agar: G: közepes, halvány elefántcsont (2 ca)1 színű, korémiára emlékeztető alakzatok képződnek AM: közepes, fehér SP nincs (C) glükóz-aszparagin agar: G: közepes, élénk aranysárga (3 pa)1 és élénk sárga (2 pa)' közötti színű AM: gyér, fehér SP: élénk sárga (2 pa)1 (D) glicerin-aszparagin agar: G: közepes, halvány elefántcsont (2 ca)1 színű, korémiára emlékeztető alakzatok képződnek AM: gyér, fehér SP: nincs (E) keményítő agar: G: közepes, halvány elefántcsont (2 ca)1 és szalmasárga (2 ea)1 közötti színű, korémiára emlékeztető alakzatok képződnek AM: bőséges, halvány elefántcsont (2 ca)1 színű SP: nincs (F) nutriens agar: G: közepes, halvány elefántcsont (2 ca)1 és gyarmati sárga (2 ga)1 közötti színű, korémiára emlékeztető alakzatok képződnek AM: gyér, fehér SP: nincs 5 10 15 20 25 30 35 4C 45 50 55 6) 65 2
