179542. lajstromszámú szabadalom • Specifikus kötésen alapuló kimutatási módszer és kompozíció antigének és haptének kimutatására
MAGVAR SZABADALMI 79542 NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS 0 Bejelentés napja: 1976. IV. 27. (M1-600) Amerikai Egyesült Államok-beli elsőbbsége: 1975. IV. 28.(572 008) Nemzetközi osztályozás: NSZ03: G 01 N 33/48, G01 N 33/54, G01J 1/58, C12Q. 1/00 országos találmányi HIVATAL Közzététel napja: 1982. III. 29. Megjelent: 1984. VI. 30.i Talàlmà^Ç>\ ( . Szabadalmi Tár N's'^2ï;t-AJDON/* i' Feltalálók : Szabadalmas : Boguslaski Charles Robert biokémikus, Elkhart, Carrico Joseph Robert bio- Miles Laboratories, Inc., Elkhart, kémikus, Bremen, Indiana, Christner Edward James biokémikus, Ann Arbor, Indiana állam, Michigan, Amerikai Egyesült Államok Amerikai Egyesült Államok Specifikus kötésen alapuló kimutatási módszer és kompozíció antigének és léptének kimutatására 1 h 2 A találmány antigének és haptének kimutatására alkalmas specifikus kötésen alapuló új módszerre, továbbá ezen új kimutatási módszerhez alkalmazható kompozícióra és eszközre vonatkozik. Tekintettel a radioaktív anyagok kezelésének veszélyességére és nehézségére, az utóbbi időkben kiterjedt kutatás folyt olyan, specifikus kötésen alapuló kimutatási módszerek kidolgozására, amelyek ugyanolyan érzékenyek és gyorsak, mint a radioimmunológiai kimutatási módszerek, azonban a specifikus kötési reakció követésére a radioaktivitástól eltérő jellemzőt hasznosítanak. Miként még a későbbiekben részletesen tárgyalni fogjuk, radioaktív atomok vagy molekulák helyett jelzőanyagként olyan anyagokat j már hasznosítottak, mint az enzimek, fluoreszkáló molekulák és bakteriofágok. A specifikus kötésen alapuló kimutatási módszerek különböző típusai közül először az úgynevezett heterogén típusúakat fogjuk tárgyalni. A heterogén típus esetében egy 2Q úgynevezett kötött fázis és egy úgynevezett szabad fázis szeparálódása megy végbe. Erre a szeparálásra olyan specifikus kötésen alapuló kimutatás végrehajtásához van szükség, ahol a kötött fázisban levő jelzett anyag nem különböztethető meg a szabad fá- 2s zisban levő jelzett anyagtól. Jelzőanyagként enzimet alkalmazó, heterogén típusú kimutatási módszereket ismertetnek például a 3 654 090, 3 791 932, 3 839 153, 3 850 752 és 3 879 262 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, valamint ajournai of Immunological Methods, 1, 247 (1972) és Journal of Immunology, 109, 129 (1972) irodalmi helyeken. Mindezen módszerek esetében egy enzimet kapcsolnak kémiai úton a kimutatandó ligandumhoz vagy pedig a ligandum specifikus kötőpartneréhez, majd alkalmas heterogén specifikus kötési reakciórendszert állítanak össze, amikor is egy vizsgálandó mintával való inkubálás után a reakció rendszer oldhatatlan részével vagy oldható részével összefüggésben jelentkező enzimaktivitás nagysága a vizsgálandó mintában levő, ismeretlen koncentrációjú ligandum mennyiségének a függvénye. Az enzim-konjugátok, vagyis az enzim és a kimutatandó ligandum vagy az utóbbi specifikus kötőpartnere közötti kémiai úton képzett vegyületek előállításával és azonosításával kapcsolatos nehézségek azonban súlyos hátrányai az itt vázolt módszernek. Az 1 392 403 számú nagy-britanniai és a 2 201 299 számú francia szabadalmi leírásokban olyan heterogén típusú kimutatási módszereket ismertetnek, ahol jelzőanyagként egy spektrofotometriásán aktív anyag nem aktív prekúrzoiját használják. A vizsgálandó mintának a specifikus kötési reakciórendszerrel való inkubálása után a reakciórendszer oldhatatlan részét és folyékony részét egymástól elválasztják, majd a folyékony részben jelenlevő jelzőanyag mennyiségét — amely a mintában levő kimu*atandó ligandum mennyiségének a függvénye — 179542
