179497. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az inzulin-kiválasztást befolyásoló biológiailag hatásos anyag előállítására Bordetella-pertussis felhasználásával
179497 17. táblázat 28 Intravénás injekcióban 25 /ug/kg glükagont adtunk be. Az eredmény minden egyes kísérletnél 5 állatból kapott középérték ± standard hiba. 8. Effektiv dózis és a beadás módja A szigeteket-aktiváló-protein effektiv dózisa embereknél 10 ng/kg - 1 jug/kg testsúly, a tisztított találmány szerinti anyagot beadva. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy 2 Mg/kg testsúly nagyságú vagy még ennél is nagyobb dózisokat adunk be egyszerre. A beadás leghatékonyabb módja az intravénás injekció, de használhatók a beadás más módjai is. 9. A hatás stabilitása Hőstabilitás A hőstabilitást a következő eljárással határoztuk meg: a mintaoldatot (40 Mg/ protein/ml, pH = 7,0) különböző, 37 és 100 °C közötti hőmérsékletek hatásainak vetettük alá 15 percig, és meghatároztuk az inzulinkiválasztást serkentő aktivitásban beálló változásokat. összehasonlító mintaként egy 4 °C-on tartott mintát használtunk, és az aktivitást mint relatív aktivitást adtuk meg, a 4 °C-on tartott minta aktivitását 100-nak véve. Az eredményeket a 16. táblázatban foglaltuk össze. 27 16. táblázat Hőmérséklet, ° C Relatív aktivitás 4 100 37 100 56 113 60 76 70 53 80 18 100 13 A szigeteket-aktiváló-protein hőstabilitási tartománya ugyan 56 °C alatt van, de még a 80 °C-os hőmérsékletnek alávetett oldat is mutatott aktivitást. pH-Stabilitás 40 Mg protein/ml proteintartalmú oldat pH-értékét 3 n sósavval vagy 3 n nátriumhidroxiddal beállítjuk, és 24 órán át 4 °C-on tartjuk. Ezután az így kapott oldatok pH-értékét közel a semleges pontig visszaállítva beadjuk a kísérleti állatoknak, és az inzulinkiválasztást serkentő aktivitást meghatározzuk. Az eredményeket mint relatív aktivitásokat adjuk meg, a 7 pH-értéken mért aktivitást 100-nak véve. Az eredményeket a 17. táblázat szemlélteti. pH Relatív aktivitás 1 16 2 27 3 43 4 112 7 100 9 120 10 89 11 23 12 0 A stabil tartomány ugyan 4-9 pH között van, de még a 3 pH-érték alatti és 10—11 pH-értékü oldatokban is kimutatható aktivitás. 10. Akut toxicitás A szigeteket-aktiváló-protein tisztított mintájának LDso akut toxicitását (Mg/kg testsúly) egerekben (ddy-törzs) vizsgáltuk. A kapott eredményeket a 18. táblázat szemlélteti. 18. táblázat 6 9 Szubkután injekció 540 580 Intravénás injekció 222 155 11. Gyógyszerészeti alkalmazások Mint ahogy a fentiekben részletesen kifejtettük, a találmány szerinti biológiailag hatásos anyagok diabetesnél igen értékes gyógyszerek és preventív anyagok. Az effektiv dózis embereknél alkalmazva a hatóanyag fajlagos aktivitása szerint változik. A hatóanyagot általában 10 ng/kg testsúly és több tíz Mg/kg testsúly koncentráció tartományban alkalmazzuk az inzulinkiválasztó aktivitás elősegítésére. A pácienseknek történő beadás jellegét tekintve az intravénás injekció mutatkozik minden felhasználási célra a legalkalmasabbnak, de más beadási módokat is alkalmazhatunk, például intraperitoneális, intramuszkuláris vagy szubkután injekcióban, közvetlenül az emésztőszervekbe alkalmazva, és orálisan, intrarektálisan, szublinguálisan, orrba vagy a nyálkahártyákon, intraartériálisan, intralymphangiálisan vagy intratracheálisan. így a megfelelő beadási formák lehetnek injekcióoldatok, kúpok, a bélben és gyomorban oldódó bevonattal ellátott tabletták, szublinguális tabletták és inhalálószerek. Egy kimondottan egyszerű injekcióösszetétel: 10 000 egység inzulinkiválasztást elősegítő anyagból, 9 mg nátriumkloridból és steril desztillált vízből álló 1 ml keverék. A találmány szerinti gyógyszerkészítményekbe a megfelelő módon bekeverhetők természetesen más 5 1D 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
