179497. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az inzulin-kiválasztást befolyásoló biológiailag hatásos anyag előállítására Bordetella-pertussis felhasználásával
MAGYAR nëpkoztarsasAg SZABADALMI LEÍRÁS 179497 Bejelentés napja: 1978.1. 31. (KA-1500) Uniós elsőbbsége: 1977.11. 01.(10397/77 sz.) Japán ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1982. III. 29. Megjelent: 1984. V. 31. Nemzetközi osztályozás: NSZ03: C 12 P 21/04 \* Tár Feltalálók: Szabadalmas: Yajima Motoyuki farmakológus, Ohtsu-shi, Shiga-ken, Hosoda Koichi farma- Kakenyaku Kako Kabushiki kológus, C.huzu-cho, Yasu-gun, Shiga-ken, Tomioka Chikanori farmakológus, Kaisha, Tokió, Japán Ohtsu-shi, Shiga-ken, U1 Michio farmakológus, Sapporo-shi, Hokkaido, Japán Eljárás az inzulin-kiválasztást befolyásoló biológiailag hatásos anyag előállítására Bordetella pertussis felhasználásával 1 A találmány tárgya eljárás biológiailag hatásos új anyag, ún. „szigeteket-aktiváló-protein” (Islets-Aktivierungs-Protein) előállítására, amely emlős állatoknál inzulin-kiválasztást elősegítő és glükóztoleranciát javító hatást fejt ki. Ezt az anyagot a Bordetella pertussis mikroorganizmus (I vagy II fázisú) megfelelő törzseinek erre alkalmas táptalajon történő tenyésztésével állítjuk elő. A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása. Azt találtuk, hogy a patogén Bordetella pertussis mikroorganizmusok sejtjeiben és tenyésztőközegeik felülúszó részében található egy anyag, amely azzal a nem várt farmakológiai hatással rendelkezik, hogy az inzulinkiválasztást elősegíti, és a normális vércukorszintet fenntartja. így ez az anyag mint értékes gyógyszer használható a diabetes különböző fajtáinak a kezelésére és megelőzésére. Sikerült ezt az új, protein-jellegű anyagot izolálni, és mint inzulinkiválasztást potenciáló faktort kémiailag azonosítani. A találmány szerint előállított biológiailag hatásos anyag, amelyet „szigeteket aktiváló proteinnek” nevezünk, feltűnően nagy inzulinkiválasztást elősegítő hatással rendelkezik igen kis dózisban (kb. 0,1 /ag/kg testsúly), és a diabetes különböző fajtáinak kezelésére és megelőzésére használható. A találmány szerinti inzulinkiválasztást elősegítő aktív faktor (a következőkben egyszerűen „aktív faktor”) proteinjellegű anyag, amely a kórokozó baktériumokként ismert Bordetella pertussishoz (I vagy II fázisú) tartozó mikroorganizmusok, elsősorban a B. pertussis (I fázisú) szilárd vagy folyékony táptalajban történő tenyésztésével és a hatóanyagnak a tenyésztett baktérium sejtjeiből és a táptalajból végzett izo- 5 lálása és tisztítása útján állítható elő. Az aktív faktor izolálását a baktériumtenyészetből és annak tisztítását a szokásos módon végezzük, például kicsapással, kromatográfiával, molekulaszitával, elektroforézissel vagy biológiai módon. Ezek az 10 eljárások önmagukban vagy egymással megfelelően kombinálva használhatók úgy, hogy speciális izoláló- és tisztító-eljárás nem definiálható. A találmány szerinti aktív faktor kivonására és tisztítására igen előnyösnek mutatkozott például egy 1-' olyan c, '■-»»kromatográfiás eljárás, ahol a táptalaj felüluszó re». :t átvezetjük egy oszlopon, amelynek töhete hidroxiapatit (például a Biochemical Industry Ltd. kereskedelmi terméke), CM-Sepharose Cl— 6B (a Pharmacia Fine Chemicals kereskedelmi terméke), 20 vagy Con A-Sepharose-4B (a Pharmacia Fine Chemicals kereskedelmi terméke). Az aktív faktor ezekre az oszloptöltetekre nagyfokú szelektivitással adszorbeálódik, és megfelelően választott eluálószer, például 0,5 M nátriumkloridot 25 tartalmazó 0,1 M foszfát-pufferral (pH = 7,0) eluáljuk. A tisztított terméket ezután a felesleges sók eltávolítása céljából dializáljuk, így kapjuk a tiszta aktív faktort. Mivel az aktív faktor a tenyésztett baktérium sejtjeiben is található, kívánt esetben ezekből is izo- 30 lálható, például úgy, hogy a sejtszuszpenzióhoz nát-179497
