179484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-amino-tiofén-4- karbonsav-származékok előállítására
5 179484 6-közeget elszappanosítjuk, megsavanyítjuk (csak a lipogenézszint meghatározásához) és hexénnel extraháljuk. Ennél a lépésnél a lipideket kiszámítjuk (a lipogenéz-szint meghatározásához), vagy digjtoninnal kicsapjuk, mossuk és kiszámítjuk (a koleszteroge- 5 nézszint meghatározásához). A ^H20 és (14C)alanin zsírsavakká vagy szterinekké történő átalakulását folyadékszcintillációs számlálóban határozzuk meg. Az eredményeket az I. táblázatban a zsírsavakká vagy koleszterinné átalakult nMól H2 0 és alanin formájában és C02-é oxidálódott nMól alanin alakjában pro mg szárazsejt pro 60 perc adjuk meg. I. táblázat 3-amino-4-karbometoxi-2-n-propil-tiofén-hidroklond hatása a lipidszintézisre és C02 termelésre izolált patkány hepatocitákon. Mennyiség Zsírsav szintézis Koleszterinszintézis C02 termelés átalakult átalakult átalakult — nM H20 alanin H20 alanin alanin Kontrollérték (DMSO) — 100 100 100 100 100 Teszt-vegyület 0,05 17 9 28 19 49 0,25 21 10 29 21 50 0,10 18 10 35 23 53 0,05 18 11 33 26 54 0,01 30 19 49 31 73 In vivo zsírsav és koleszterin-szintézis. 25 álatokat további 30 perc elteltével lefejezzük, má-Patkányokat 48 órán át éheztetünk, majd 5-15 napon át 1% kukoricaolajat és 70% glükózt tartalmazó táppal etetünk. A kísérleti napokon a teszt-vegyületet a 3 órás etetési időszak előtt 30—60 perccel 30 orálisan, vagy a 3 órás etetési időszak után 60 perccel intraperitoneális injekcióval beadjuk. Az állatok 30 perc múlva 1 mCi * 3H2 O-t, 12,3 mg alanint (5 pCi) és 30,6 mg a-keto-glutársavat 0,25 ml konyhasó-oldatban tartalmazó injekciót kapnak a farokvénába. Az 35 jukat gyorsan kivágjuk, elszappanosítjuk és megsavanyítjuk (csak a lipogenéz-szint meghatározásához) és hexánnal extraháljuk. A lipideket megszámoljuk (a lipogenéz-szint meghatározásához), vagy digitoninnal kicsapjuk, mossuk és megszámoljuk (a koleszterogenéz meghatározásához). A H20 és alanin zsírsavakká vagy szterinekké történő átalakítását folyadék szcintillációs számlálóban végezzük el. Az eredményeket a II—V táblázatban foglaljuk össze. II. táblázat Intraperitoneálisan beadagolt 3-amino-4-karbometoxi-2-n-propil-tiofén-hidroklorid hatása a lipogenézisre és koleszterogenézisre in vivo. Mennyiség Zsírsavszintézis3 Koleszterinszintézis3 mMol/kg //Mól alanin //Mól H2 O pMol alanin Kontrollértékek ------- 614 + 66 1,36 ±0,07 35,7 + 3,2 Tesztvegyület 0,1 251 ± 36 0,85 ± 0,06 17,6 ±1,9 3 = Az adatok a 30 perc alatt zsírsavakká, illetve koleszterinné átalakult alanin és H2 O mennyiségre/g máj vonatkoznak. III. táblázat 3-amino-4-karbometoxi-2-n-propil-tiofén-hidroklorid hatása a szérum lipid szintre Dózis mMol/kg i.p. Triglicerid Koleszterin mg% mg% Kontrollértékek Tesztvegyület 0,1 67 ±4 51 ±3 116+ 7 105 ±11 3
