179463. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dexozi-narazin antibiotikum-komplex előállítására
19 179463 20 +Stabex 11, Staley, Decatur, Illinois, USA, ++Amber EHC, Amber Laboratories, Juneau, Wisch, USA. +++N-Z Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, New York, USA. II táptalaj: Tápióka dextrin+ 30 g Glükóz Enzimesen hidrolizált 15 g kazein++ Enzimesen hidrolizált 3 g kazein+++ 1 g Élesztőkivonat 2,5 g CaC03 2 g MgS04 x 7H2 O 1 g Melasz 15 g Finomított szójababolaj 5,0 ml Csapvíz 1 literre feltöltve A táptalaj pH-ja beállítás nélkül 6,4. +Stabex 11, Staley, Decatur, Illinois, USA ++Amber EHC, Amber Laboratories, Juneau, Wisch. USA. +++N-Z Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich. New York, USA. Ill táptalaj Szójaliszt 25 g Glükóz 20 g CaC03 2g Na 2 S04 x IOH20 1 g Finomított szójaolaj 20 ml Olajsav-metil észter 20 ml FeS04 x 7H20 0,6 g MnCl2 x 4H2 O 0,3 g Aszkorbinsav 0,018 g Desztillált víz 1 literre feltöltve A táptalaj pH-ja beállítás nélkül 6,5. A táptalajt 10 napon át 30 °C hőmérsékleten 5 cm kitérésű percenként 250-et forduló rázóasztalon inkubáljuk. B. Tankfermentáció A tankfermentációt vegetatív és főfermentációs táptalajjal végezzük, ahogy azt a rázott tenyészetek kapcsán az A. fejezetben ismertettük. A tankfermentációhoz 10 ml vegetatív tenyészettel 400 ml, 2 liter térfogatú Erlenmeyer lombikban sterilezett második vegetatív táptalajt oltunk. 24 órán át 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk a tenyészetet, majd 800 ml ilyen vegetatív tenyészettel 100 liter, 165 liter térfogatú fermentorban sterilezett főfermentációs táptalajt oltunk. A táptalaj pH-ja a 121 °C hőmérsékleten 45 percen át végzett sterilezés után 6,8 ±0,1. 10 napon át 30 °C (± 1 °C) hőmérsékleten fermentálunk. A fermentoron 0,5 térfogat levegő/térfogat tenyészet steril levegőt áramoltatunk át percenként, miközben hagyományos keverőt működtetünk, amely percenként 300-at fordul. 2. példa A dezoxi-narazin antibiotikum-komplex elkülönítése Az 1. példában megadottak szerint a II táptalajon előállított fermentlé 4 literének pH-ját tömény hidrogénkloriddal 3,0-ra állítjuk be, majd egy órán át keverjük. Az így kapott tenyészlevet 125 g Hyflo Super-Cel szűrési segédanyag (diatomaföld, Johns-Man ville Corp.) adagolása után szűrjük. A micéliumot elkülönítjük, és literenként 50 g nátriumhidrogénkarbonátot tartalmazó 2 liter térfogatú metanolban szuszpendáljuk, majd keverjük a szuszpenziót. Szűrjük azextraktumot, a metanolos szűrletet csökkentett nyomáson 450 ml térfogatra töményítjük. Ennek az oldatnak a pH-ját tömény hidrogénkloriddal 7,5-re állítjuk be. Az így kapott oldatot 2 x 500 ml kloroformmal extraháljuk. Egyesítjük a kloroformos extraktumokat, nátriumszulfáttal vízmentesítjük és szűrjük. Csökkentett nyomáson desztilláljuk a szűrletet, ami után desztillációs maradékként 2,0 g nyers dezoxi-narazin komplexet kapunk. 3. példa A dezoxi-narazin és az epi-dezoxi-narazin elkülönítése 2 g, a 2. példában megadott módon előállított, nyers dezoxi-narazin komplexet lehető legkevesebb benzolban oldunk, az oldatot szilikagélből (Merck 7729) 1,5 x 22 cm méretű oszlopra töltjük. Az elkülönített frakciókat, a használt oldószereket és a kapott anyagmennyiséget a következő, 9. táblázatban ismertetjük. A frakciókat vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáltuk, a kifejlesztést etilacetáttal végeztük. A 16-17. frakciók 126 mg 20-dezoxi-epi-17-narazint tartalmaztak. A 18—23. frakciók 20-dezoxi-narazint és 20-dezoxi-epi-17-narazint tartalmaztak. A fentiekben ismertetett módon a 18—23. frakciókban kapott 20-dezoxi-narazin és 20-dezoxi-epi-17-narazin keverékét preparatív vékonyrétegkromatográfiával, a kifejlesztést etilacetáttal végezve tisztítottuk. Az egyik lemezre 105 mg, a másikra 130 mg keveréket tettünk, miután kevés diklórmetánban oldottuk. Az elválasztást Merck preparatív réteggel végeztük. Miután a kifejlesztés megtörtént, ultraibolya fénnyel két elkülönült foltot figyelünk meg. Mindkét folt 1 — 1 anyag jelenlétére utal, amelyet diklórmetán és metilalkohol 4 : 1 arányú elegyével extraháltunk a lemezről. A futtatáskor a két vegyület közül a dezoxi-narazin lassabban mozog. Arról a lemezről, amelyre 105 mg keveréket vittünk fel, 7,5 mg 20-dezoxi-epi-17-narazint és 27 mg dezoxi-narazint kaptunk. A 130 mg keverékből 4,0 mg 20-dezoxi-epi-17-narazint és 56 mg 20-dezoxi-narazint különítettünk el. 4. példa A 20-dezoxi-narazin elválasztása 95 liter tenyészlé pH-ját hidrogénkloriddal 3-ra állítjuk be, majd egy órán át keverjük. 3% Hyflo Su-5 iO 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6C 65 10
