179207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új streptomyces-metabolit előállítására
179207 A lombikokat beoltás után 30 C°-on rázzuk. Ezután a hámom lombik tartalmát és a kapott elegyet oltóanyagként használjuk fel tes acél fermentorba forgó rázógépen 3 napon át egyesítjük, egy rozsdámén» töltött 30 liter steril táptalaj beoltására. Ebben a lépésben a következő összetételű táptalajt használjuk fel? glicerin 3S0 vegyes BSP 70 szójaliazt 1,0 3* kréta 0,25 sv carelóz 2*9 ü nátríumklcrid 0,5 15 magnéziumssulfát heptahidrát 0,05 ss nyomelem-koncentrátum 0,1 » desztillált viz ad 30 liter % A fermentációt 70 órán át .30 C°-on végezzük» A fermentor for-» tartalmát négy siklapáttal felszerelt túrbinakeverővel 330 dulat/perc sebességgel keverjük«, és 15 liter/perc sebességgel levegőztetjük. Az elegyhez az autoklávos kezelés előtt 30 m3, "Silicolapse” kereskedelmi nevű szilikon-alapú habzásgátlót adunk-j—A—f ermentáaióa-d.üü^égán--ka-p6-t't--eiagy-^H«”'ier-17^jló--A-'ka-pot fc 22 liter 1ermentiéhes azonos térfogatú éti lacetátot adunk, A~ " kétfázisú elegyet 30 percig keverjük, majd a fázisokat centrifugális szeparátorban elválasztjuk egymástól» Á körülbelül 18 2- -1 ter térfogatú etiiacetátos extraktumot vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk, majd szűrjük, és a azürietet csökkentett nyomáson bspároljuk. 10,7 g olajos maradékot kapunk» A kapott Concentrâtumból a következőképpen különítjük el az M 133 603 metabolitots A 10,7 g olajos maradékot a lehető legkisebb mennyiségű eb flaue tá.than~old.jukrf ~gs~az oldatot'~et±'lacsrtg:tba,ir-3‘nusrpcfr.idáitv semleges aluminiumoxiddal /Woelm IT/ töltött 18x4 cm méretű oas~ lop tetejére visszük fel» Az oszlop 200 g alumíniumnáldob tartalmazó Az oszlopot először étilacetáttál eluáljuk, majd az elválást etiiacetát és metanol Isi térfogatarányu elegyével. folytatjuk, végül metanollal fejezzük be* Az oldószeres front álhaladása után a következő eluátumfrakciókat fogjuk fel; A akció száma; A frakció térfogata? Eluáléazer 1c-1-50-ml-eb-ilacetát-2. 150 ml evils.ee tát * J o I50 ml e 17 i 1 a c e t at 4» 150 ml etiiacetát 5* I50 ml etilacet át/me b au c-1 6» 150 ml e t ilacetát/met ancl 7o I5O ml etilacetát/metau 01 8» I50 ml etilacetát/metanol 9 = 200 ml metanol. 10» 200 ml metanol 117 ~200~Ml metanol A vékonyrétegkromatográfiás elemzések adata /adszorbens; azillkagél, eluálószer? 20 térfogat % talmazó, 60-80 C° forráspont’! petroléter/ a 7-11» talmaz M 139 603 metabolitot /R^*-'-'0,22/« A 7-1-• 1 szerint seeront tarfrakció tareluátumfrakciót egyesitjük és bepáröljuk. A kapott 840 mg viszkózusgumiTM szerű maradékot preparativ rétegkromatográfíás utón tisztítjuk;
