179124. lajstromszámú szabadalom • Stabilizált ureáz-készítmény és reagens karabamid kimutatására
179124 és olyan stabilizált ureáz készítmény készítése, amely nagymértékben tisztított alakban is olyan kielégítő tárolási stabilitással rendelkezik, hogy forgalomba hozható. A feladatot a találmány szerint stabilizált ureáz-készitménnyel oldjuk meg, melyet az jellemez, hogy stabilizálószerként glutation, etiléndiamintetraecetsav /EDÎA/ és citrát keverékét tartalmazza. Meglepő módon az említett három anya^ keveréke nagymértékben tisztított ureáz stabilizálására is jól alkalmazható, annak dacéira, hogy az emlitett keverék egyes alkotói nem fejtenek ki stabilizáló hatást. A találmány szerinti stabilizált ureáz-készÍtmény az ureáz, glutation, EDTA és citrát alkotókat előnyösen 1:0,5 - 5íO,5 - y: 0,5-5 arányban tartalmazza. Az ilyen, előnyben részesített Összetételi tartományba eső készítmények különösen az előnyös kb. 50-500 E/mg aktivitási tartományban rendelkeznek kiváló stabilitással és jpl. liofilizálás és 12 hetes, 55 C°-on végzet'v tárolás után meg mindig a liofilizálás előtti kiindulási aktivitás 100 /é-ával rendelkeznek. Stabilizáló szer nélkül már a liofilizálásnál 50-80 % aktivitási veszteség jelentkezik. Az előnyben részesített összetételi tartományon kivül eső, találmány szerint stabilizált ureáz készítményekkel is még igen jó stabilizálási hatások érhetők el. A találmány szerint stabilizált enzimkészitmény előnyösen olyan ureázt tartalmaz? amelyet stabilizáló keverék hozzáadása előtt tisztítás céljából a dextránnal kezeltek. Ti yen dextrános kezelést alkalmazva, sikerült az enzim aktivitása:, mintegy kétszeresére növelni. Úgy tűnik, hogy a dextrános kezeléssel egyidejűleg instabilizáló szennyeződést lehet eltávolítani, és igy azok az ureáz-készitmények, amelyeket előzőleg dextránnal kezeltek, különösen nagy stabili-tással tűnnek ki a stabilizáló-keverék hozzáadása után. A dextránnal való kezelés egyszerűen úgy végezhető, hogy a dextránt hozzáadjuk az enzim-oldathoz, vagy oszlop-kromatográfiás módszerekkel is történhet. Különösen kedvező, ha molekulaszürő tulajdonságokkal rendelkező térhálósított terméket alkalmazunk dextránként, mivel itt egyidejűleg az ureáz sótalanitása érhető el, a zavaró szennyeződés feldusitása és eltávolítása mellett. Megfelelő térhálósított vagy nem tér- ' hálósitott dextrán-készítmények a kereskedelemben beszerezhetők. A találmány szerinti stabilizált ureáz-készítmény különösen karbamid kimutatására alkalmazható. A találmány oltalmi körét képezi a karbamid kimutatására szolgáló reagens is, amelyet az jellemez, hogy a találmány szerint stabilizált ureáz-készitményt együtt tartalmazza az ammónia kimutatására szolgáló rendszerrel. Ammónia kimutatására számos rendszer ismert, és ezek alkalmazhatók a találmány szerinti reagens számára, amennyiben nem tartalmaznak olyan alkotókat, amelyek az ureáz által katalizált reakciót vagy magát az ureázt zavarják. Ilyen, ammónia kimutatására szolgáló rendszer egy píl-indikátorból, igy például brómtimolkékből állhat, amely aZ ammóniaképzodésné}. a pH-érték növekedését szinváltozással vagy ehhez hasonlóval jelzi. Egy ilyen jellegű rendszer alkalmas például teszt-papirok vagy tesztfilmek számára, karbamid vérben vagy szérumban való kimutatására. A találmány szerint stabilizált ureáz-készitmény annyira ellenálló, hogy alkalmas papir, film vagy hasonló hordozóanyagok impregnálasára, vagy kötőanyaggal együtt reakcióképes ré2
