179041. lajstromszámú szabadalom • Eljárás C-076 vegyületek és azokat tartalmazó féregírtószerek előállítására
27 179041 28 A2b) tartalmaznak. A 9-28 frakciók a C-076 A1 és A2 vegyületek elegyét tartalmazzák. 12. példa 5 A 12. példából származó 150 g C—076 Bl-et 3 liter hexánból, toluolból és metanolból álló 3:1:1 arányú oldószer elegyben oldunk. Az oldatot a 9. példában leírt méretű Sephadex LH—20 oszlopon engedjük keresztül a fenti oldószerben és a frakciókat 10 250 ml/perc sebességgel szedjük. Két 20 literes oldószerelegy-adagot szedünk, melyet eltávolítunk, majd 10 liter előfrakciót szedünk és szintén eltávolítjuk. Ezután 30 két literes dús frakciót szedünk. Az 1-13 és 25-30 frakciókat eltávolítjuk. A 14-16 15 frakciókat egyesítjük és az egyesített frakciók 80 g túlnyomórészt C—076 Bla vegyületet tartalmaznak. A 22-24-es frakciókat is egyesítjük és ezek 6,7 g túlnyomórészt C—076 Blb-ből állnak. A 17-21 frakciók a C-076 Bla és Blb vegyületek elegyét 20 tartalmazzák. A fenti 17—21-es frakciókat egyesítjük, bepároljuk és a fenti oldószer-rendszerben Sephadex LH-20 oszlopon engedjük keresztül. Három 20 literes előfrakciót szedünk, melyeket eltávolítunk. A dús frakciókat a következőképpen szedjük: 25 öt egyenként 2 literes frakció (1-5 frakció), 20 egyenként 1 literes frakció (6-25 frakció), 10 egyenként 2 literes frakció (26-35 frakció). Az 1—15 frakciókat eltávolítjuk, a 16-21-es frakciók 13,5 g C-976 Bla és 0,4 g C-076 Blb vegyületet, a 30 22-26 frakciók 44 g C-076 Bla és 0,13 g C-076 Blb vegyületet, a 27—30 frakció 10,2 g C—076 Bla és 0,8 g C—076 Blb vegyületet tartalmaznak. 13. példa 35 8 C—076 komponensből álló elegyet nagynyomású folyadék-kromatografáló 10 mikron p Bondapak Ci s szilikagéllel töltött oszlopon kromatografálunk, (Waters Associates Inc., Maple Street, 40 Milford, Massachusetts 01757). Az oszlop mérete 4 mm x 30 cm, és az oszlopot 85:15 térfogatarányú metanol-víz eleggyel állandó 40 °C-os hőmérsékleten eluáljuk. 1,2 ml/perc áramlási sebesség mellett mind a 8 vegyületet elválasztjuk, és a fenti állandó 45 feltételek mellett az egyes vegyületekre jellemző eluált térfogatok a következők: Eluált térfogatok 50 (Ve) ml C-076 B2b 5,90 C-076 B2a 6,52 C-076 A2b 7,12 C-076 A2a 7,88 C-076 Blb 8,36 C-076 Bla 9,60 C-076 Alb 10,24 C-076 Alá 11,88 A C-076 „b” vegyületeket a megfelelő „a” vegyületektől például nagynyomású folyadék-kromatográfiával választjuk el. 30 mikroliter C-076 Alá és Alb elegyének abszolút metanolos oldatát (amely 30 mikrogramm C—076 Alb-t tartalmaz) Spherisorb 5 mikron ODS—(Spectra Physics)-sel töltött nagynyomású folyadék-kromatografáló oszlopra helyezzük. Az oszlopot 0,15 liter/perc sebességgel metanol és víz 85 :15 arányú elegyével eluáljuk. A termékek eluálását az eluálószer ultraibolya abszorpciójának megfigyelésével követjük nyomon, és az UI monitor kivezetőjénél szedjük az egyes komponenseket. 30 mikrogramm C—076 Alb-t nyerünk és tömegspektrográffal elemezzük. Annek a mintának a tömegspektrumát a III. táblázat 2. oszlopa tartalmazza. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a C-076 jelű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a C-076 vegyületeket termelő Streptomyces avermitilis törzzsel asszimilálható szén- és nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó vizes táptalajt aerob körülmények között fermentálunk és a C—076 jelű vegyületeket kinyerjük a fermentléből. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a C—076 jelű vegyületeket termelő törzsként Streptomyces avermitilist (NRRL 8165/ATTC 31 267) használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 20-40 °C közötti hőmérsékleten pH = 5,0—9,0 mellett végezzük. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 24—30 °C-on és pH = 6,0—7,5 értéken végezzük. 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a táptalaj 0,5-5 súlyszázalék szénforrást és 0,2-6 súlyszázalék körüli nitrogénforrást tartalmaz. 6. Az 1—5. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 1-8 napig végezzük. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a C—076 jelű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a C—076 jelű vegyületeket a fermentlé szűrésével izoláljuk, a micéliumot vízzel elegyedő szerves oldószerrel extraháljuk, a szerves oldószert bepároljuk és a maradékot vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel extraháljuk. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentlét szűrjük. 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése állatgyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy vagy több C—076 jelű vegyületet a szokásos hordozó és/vagy vivőanyagokkal összekeverjük, vagy állati takarmányba keverjük. 5 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 14 834044 - Zrínyi Nyomda, Budapest
