179013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-35512 antibiotikum-keverék előállítására
45 179013 46 Az A—35 512 B ágiikon előállítása A 6. példában megadottak szerint előállított A-35 512 B dihidrogénklorid só 5,0 grammnyi mennyiségét 200 ml vízben oldjuk. Az oldat pH-ját 4n hidrogénkloriddal savanyítjuk (14 ml hidrogénklorid). A kapott oldatot két órán át visszacsepegő hűtő alatt forraljuk. Ezután lehűtjük az elegyet és csökkentett nyomáson eredeti térfogatának háromnegyed részére töményítjük. Addig adunk 6 n hidrogénkloridot az oldathoz, amíg a csapadék kiválása be nem fejeződik. Szűréssel elkülönítjük a kivált csapadékot, szárítjuk, amikor 3,56 g nyers A—35 512 B aglikon-hidrogénkloridot kapunk. A szűrletet töményítjük és analizáljuk. Az analízis adatai szerint ez glükózt, fukózt, mannózt és rhamnózt tartalmaz. A nyers A—35 512 B aglikont savas mosott alumíniumoxidból (Woelm, Grade I) készített oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást víz és metanol 1 :9 arányú elegyével végezzük. Az oszlop eluálódását cellulóz vékonyrétegkromatográfiával követjük. Az A—35 512 B aglikont tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson kivitelezett desztillációval töményítjük. Desztillációs maradékként 3,98 mg részben tisztított terméket kapunk, összehasonlító vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok szerint (a detektálást ninhidrinnel végezzük) biológiailag nem aktív szennyeződések még jelen vannak. 100 mg, a fentiek szerint kapott részletesen tisztított A-35 512 B aglikont poliamid oszlopon (4 g, Machery—Nagel and Co., MN—SC—6, Brinkman Instrumentes Co., szemcsenagyság kisebb mint 0,07 mm) kivitelezett kromatográfiával tovább tisztítunk. Az eluálást vízzel végezzük. Az elúciót cellulóz vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük, ahogy azt az előzőekben megadtuk. Az A—35 512 B aglikont tartalmazó frakciókat egyesítjük, fagyasztva szárítjuk, amikor 64 mg tiszta A—35 512 B aglikon-hidrogénkloridot kapunk. A kiindulási A—35 512 B komponensre számított teljes kitermelés 5,08%. 16. példa Az A-35 512 B ágiikon szabad bázis alakjának előállítása 5 A 16. példa szerinti eljárással előállított A—35 512 B aglikon-hidrogénklorid 90 milligrammját metanol és víz 1:1 arányú elegyének 30 ml-ében oldjuk. Az oldatot ioncserélő gyantával (3,5 ml, BiojQ —Rad AG—3—4X, hidroxil-ciklus) semlegesítjük. 15 percen át szobahőmérsékleten keverjük a kapott oldatot. Szűréssel eltávolítjuk a gyantát, a szűrletet csökkentett nyomáson eredeti térfogatának felére töményítjük, miközben a hőmérsékletet 60 C-nál 15 alacsonyabb értéken tartjuk. A sűrítményt fagyasztva szárítjuk, amikor 68 mg A—35 512 B aglikont kapunk, szabad bázisként. 17. példa 2Q Szabadalmi igénypont: Eljárás az A, B, C, E, F, G és H komponensekből álló A—35 512 jelű antibiotikum-keverék, az A-35 512 A, az A-35 512 B, az A-35 512 C, az A-35 25 5 1 2 E, az A-35 512 F, az A-35 512 G és az A—35 512 H komponensek, továbbá az A-35 512 B komponens aglikonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy 30 a Streptomyces candidus NRRL 8 156 törzset, vagy ennek egy A-35 512 jelű vegyületet termelő mutánsát felhasználható szén- és nitrogénforrást, továbbá szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények 35 között addig tenyésztjük, amíg az antibiotikum felhalmozódik a táptalajban, majd az A—35 512 jelű antibiotikum-keveréket elkülönítjük a tenyészléből, 40 majd elkülönítjük az A-35 512 A, B, C, E, F, G és H komponenseket az A-35 512 antibiotikum-keverékből, és kívánt esetben az A-35 512 B antibiotikumot aglikonjává alakítjuk. 45 7 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 834041 - Zrínyi Nyomda, Budapest
