178706. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bisz-indol-alkaloidok és savaddíciós sóik előállítására
13 178706 14 riddal kivonatoljuk. A metilénkloridos fázisokat egyesítjük és kétszer 2,5 liter 1%-os vizes ammóniumhidroxid-oldattal kezeljük. A fázisokat ismét elválasztjuk, a metilénkloridos fázist nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Kitermelés: 3,5 g diindol-alkaloid keverék, melyet az 1. példa szerint választunk szét komponenseire. A kinyert RGH—4451 és vinkrisztin fizikai állandói azonosak az 1. példában megadottal. 5. példa 5 g leurozin-szulfátot 1,2 liter 1% etanolt tartalmazó kloroform és 250 ml ecetsav elegyében oldunk. Az oldatot —55 °C hőmérsékletre hűtjük és 2,48 g (24,48 mmól) krómtrioxid 930 ml -55 °C-ra hűtött ecetsavanhidriddel készült oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 40 percen át keverjük, majd -45. és -50 °C közötti hőmérsékletre hűtött tömény vizes ammóniumhidroxid-oldattal a pH-értéket 9—10-re állítjuk be. Ezután a kétfázisú reakcióelegyhez 5 liter vizet adunk, majd 5 perc keverés után a fázisokat szétválni hagyjuk. A kloroformos fázist félretesszük, a vizes fázist 0,5 liter kloroformmal kivonatoljuk. A kloroformos fázisokat egyesítjük és kétszer 2,5 liter 1%-os vizes ammóniumhidroxid-oldattal kezeljük. A fázisokat ismét szétválasztjuk, a kloroformos fázist vízmentes nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Kitermelés: 4,5 g leurozin-származék-keverék, melyet a következőképpen választunk szét komponenseire. A 4,5 g leurozin-származék-keveréket 27 ml 3:1 arányú benzol-kloroform elegyben oldjuk, majd az oldatot 225 g III. aktivitású alumíniumoxiddal töltött és 3 : 1 arányú benzol-kloroform eleggyel nedvesített oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást 3,5 liter 3:1 arányú benzol-kloroform eleggyel kezdjük, 1 liter 2:1 arányú benzol-kloroform eleggyel folytatjuk, és 2,5 liter 1 :2 arányú benzoi-kloroform eleggyel fejezzük be. 250 ml-es eluátumfrakciókat fogunk fel és a frakciókban levő alkaloidokat vékonyrétegkromatográfiás módszerrel vizsgáljuk. Az 1-6. számú frakció (1,5 liter) alkaloidmentes, a 7—14. számú (3: 1 benzol-kloroformos), valamint a 15—17. számú (2 :1 benzol-kloroformos) eluátumfrakciók RGH-4478 jelű új vegyületet tartalmaznak. A 18. számú 2 :1 benzol-kloroformos, valamint a 19—23. számú 1 :2 arányú benzol-kloroformos frakciók N-dezmetil4eurozint, a 24—28. számú 1 :2 arányú benzol-kloroformos frakciók N-dezmetil-N-formil-leurozint tartalmaznak. Az eluátumfrakciók feldolgozása a következőképpen történik: a) A 7—17. frakciókat egyesítjük és bepároljuk. A kapott 2,13 g nyers RGH-4478 jelű vegyületet 5 ml etanolból 5 °C-on kristályosítjuk. Kívánt esetben a terméket kloroformban oldjuk, az oldatot bepároljuk, majd az etanolos kristályosítást megismételjük. Kitermelés: 1,6 g RGH—4478 jelű vegyület. Op.: etanolból kétszer átkristályosítva: 180-182°C. Ml5 =+59,25° (c = 1, kloroform). Rf = 0,37 (adszorbens: szilikagél, futtatóelegy: dietiléter-etanol-benzol-dietilamin 100 :5 : 5 :5 arányú elegye). Mólsúly: 852. *H—NMR színkép a 4. ábrán látható. A spektrumban nem jelenik meg a kiindulási anyagra jellemző N-metil-szingulett. Ezzel szemben 4,48 ppmnél jelentkezik a N—CH5—0 csoport metilénjére jellemző multiplett jel, l,10ppm-nél az 0-CjH5 csoportra jellemző metil-triplett, 3,38 ppm-nél pedig a metilén-kvartett látható. 13C-NMR színkép az 5., az infravörös színkép a 6. ábrán látható. Az infravörös színkép jellemző csoportfrekvenciái a következők: 3470 cm-1 -OH vegyérték 2970-2830 cm-1 -OH vegyérték rezgések 1737 és 1230 cm"1 2=CO (acetil) 1612 cm'1 ^C=Cc: vegyérték 1595 cm-1 aromás váz 742 cm'1 4 egymás melletti CH (aromás) 823 cm"1 epoxid gyűrű b) A 18—23. frakciókat egyesítjük, a nyomokban jelenlévő RGH-4478 jelű vegyület eliminálása céljából 2%-os vizes kénsav-oldattal kivonatoljuk, majd a savas-vizes fázis pH-értéket tömény vizes ammóniumhidroxid-oldattal 9-re állítjuk be. A lúgos oldatot ezután háromszor 0,2 liter kloroformmal extraháljuk, a kloroformos extraktumot bepároljuk. Kitermelés: 0,25 g N-dezmetil-leurozin. A kapott terméket kívánt esetben a 165 986 számú magyar szabadalmi leírás szerint formilezéssel N-dezmetil-N-formil-leurozinná alakítjuk. Kitermelés: 0,24 g N-dezmetil-N-formil-leurozin. c) A 24—28. frakciókat egyesítjük és bepároljuk. Kitermelés: 4,42 g N-dezmetil-N-formil-leurozin. 6. példa A 2. példában leírtakkal analóg módon járunk el, de VLB-szulfát helyett 5 g leurozin-szulfátot alkalmazunk kiindulási anyagként. Kitermelés: 3,7 g N-dezmetil-N-formil-leurozin-szulfát. 7. példa 5 g (5,5 mmól) alkoholmentességig szárított vinblasztinszulfátot 1000 ml etanolmentes metilénkloridban oldunk, majd az oldathoz 120 ml ecetsavat és 3,2 ml (55 mmól) etanolt adunk. Az oldatot -55 °C hőmérsékletre hűtjük és 2,5 g krómtrioxid 470 ml -55 °C-ra hűtött ecetsavanhidriddel készített oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet -55 °C-on 40-45 percig keverjük, majd a pH érték beállítását és a metilénkloridos fázisok bepárlását a 4. példában leírt módon elvégezzük. Kitermelés: 4 g diindol-alkaloid keverék. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
