178559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Polyporus Genus-hoz tartozó gombák micéliumának előállítására
3 178559 4 hatjuk a Polyporus squamosus speciest. Az utóbbi specieshez tartozó törzsek közül viszont különösen előnyösnek tartjuk a szófiai Állami Gyógyszerminőségellenőrzési Intézetben (Szófia, Zaimov sugárút 26., Bulgária) 1971. szeptember 8-án 103 deponálási 5 szám alatt deponált Polyporus squamosus Huds PS 64 törzset, amelyet az egyszerűség kedvéért a továbbiakban a „PS 64—103” jelzés alatt fogunk említeni. A találmány értelmien továbbá előnyösen használhatjuk a PS 64—103 törzs PS 24-^44 és 10 PB 33—48 jelzésekkel jelölt variánsait. A PS 64-103 törzsre jellemző, hogy rendkívül gyorsan növekszik. Ha az inokul um mennyisége a tenyésztéshez használt táptalaj mennyiségére vonat-15 koztatva 1:1, akkor a teljes növekedési ciklus időtartama 7 óra. A PS 64-103 törzs morfológiai jellemzői az alábbiak: a hifák hossza néhány milliméter és néhány centiméter között változik, míg vastagságuk 8—10 mikron, szilárd táptalajon bolyhos telepet 20 képez, folyékony táptalajon viszont bimbódzó hifákat és szekunder (vegetatív) spórákat tartalmazó telepeket képez, csak vegetatív úton szaporodik sarjadzás, sejtosztódás, valamint a hifák és a telepek növekedése útján. 25 A PS 24-44 törzs csak annyiban különbözik a PS 64-103 törzstől, hogy hifáinak vastagsága 6-8 mikron, továbbá kevésbé kifejezetten sarjadzik. A PB 33—48 törzs abban különbözik a 30 PS 64-103 törzstől, hogy hifái hosszabbak, kevésbé saijadzik, továbbá nem képez szekunder spórákat. A PS 64—103 törzs — miként említettük — mono- és diszacharid tartalmú táptalajokon növekszik. Különösen jól növekszik ez a törzs olyan táptalajon, 35 amely glükózt és melaszt tartalmaz. A nitrogéntartalmú vegyületek közül a törzs a karbamidot, az ammónium-nitrátot és az ammónium-szulfátot hasznosítja. A foszfortartalmú vegyületek közül viszont a törzs a kálium- és nátrium-monohidrogén-foszfátot 40 és -dihidrogén-foszfátot hasznosítja. A törzs optimális tenyésztési hőmérséklete 26 °C ± 2 °C, pH-ja 6,5 ± 0,5 és 1 m3 táptalajra vonatkoztatva percenként az optimális levegőmennyiség 0,8 ± 0,2 m3. A PS 24-44 és PB 33-48 törzsek fiziológiai 45 jellemzői megegyeznek a PS 64—103 törzsével. A PS 64—103 törzs 55—58% nyersfehéijét, 42—46% fehérjét, 19-21% szénhidrátot, 6-8% cellulózszerű anyagot és 3—4% zsírt tartalmaz. Ha nitrogénhiány van, akkor a táptalajban a zsírok meny- 50 nyisége 50%-ig is felmehet, miközben a fehérje mennyisége csökken. Az összes hamutartalom 6-7%. A vitaminok B-komplexet képeznek. A PS 24—44 törzsre az jellemző, hogy a PS 55 64-103 törzséhez képest alacsonyabb a nyersfehérje-tartalma (50-52%) és ugyanakkor nagyobb menynyiségekben tartalmaz cellulózszerű anyagokat. A PB 33-48 törzs szintén viszonylag kevés nyersfehérjét (48-50%) tartalmaz, szénhidráttartalma pedig 60 a PS 64—103 törzséhez képest magasabb (mintegy 25%). A találmány szerinti eljárásban a gombamicélium növesztéséhez az alábbi összetételű táptalajokat használjuk: 65 Szilárd táptalaj glükóz 20 g ammónium-ni trát 3g kálium-dihidrogén-foszfát 1 g magnézium-szulfát 0.5 g cink-szulfát 0,01g kobalt-klorid 0,01g agar-agar 20 g víz 1 liter Folyékony táptalaj oltóanyagkészítéshez glükóz 20 g ammónium-ni trát 3g káli um-dihi drogén-foszf át 1 g magnézi um-sziűfát 0,5 g cink-szulfát 0,01g kobalt-klorid 0,01g víz 1 liter Folyékony vizes táptalaj ipari méretű tenyésztéshez répamelasz 5% ammónium-ni trát 0,15% vagy karbamid 0,1% kálium-dihidrogén-foszfát vagy nátrium-dihidrogén-foszfát 0,1% napraforgóolaj (habzásgátlóként) 0,03% A gombamicéHumot szilárd szubsztráton, éspedig a fenti összetételű szilárd táptalajon tároljuk. Ha fenti összetételű agar-agar táptalajt beoltása után Ackerman-féle kísérleti kémcsövekbe öntünk, majd a kémcsöveket 124 °C-on 45 percen át sterilizáljuk és ezt követően ferdén helyezzük el, akkor a gombamicélium laza szerkezetű, fehér színű léghifákat képez. Minden hat hónapban szükséges újradtani. Hűtőszekrényben +2 °C hőmérsékleten tároljuk. Folyékony szubsztráton levő dtóanyagot úgy állítunk elő, hogy a fent említett összetételű folyékony táptalajból 200-200 millilitert Erlenmeyer-lombikokba töltünk, majd a lombikokat gyapotdugókkal zárjuk le. Ezután a lombikokat 124 °C-on autoklávban 45 percen át sterilizáljuk, majd tartalmukat 26 °C-ra lehűtjük és steril rekeszben csak léghifákból vagy agar-agar darabhoz kapcsolódó hifákból álló micéliummal bedtjuk. A lombikokat ezután 140 fordulat/perc sebességgel mozgó rázatógépbe helyezzük 26 °C hőmérsékletű helyiségben, majd 72-96 órán át rázatjuk. Ugyanilyen összetételű folyékony táptalajt használva ugyanilyen körülmények között második és harmadik dtást végzünk. Amikor folyékony közegből először oltunk át folyékony közegre, akkor a növekedési idő 60 óra. Az ezt követő átdtásnál — ha az oltóanyag aránya a táptalajhoz 1 : 10 — a növekedési periódus már csak mintegy 36 óra. Az így kapott tenyészet +2 °C-on hűtőszekrényben legfeljebb 3 hónapon át, míg 26°C-on legfeljebb 1 héten át tárolható. 2
