178528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 2- aril-1H- perimidin-származékok és azok gyógyásztilag elfogadható sói előállítására
9 178528 10 II. Táblázat A vegyületek immunoszuppresszív hatása (Egyéni szérum-próba) Vegyidet Beadás módja Végpont-dózis (p < 0,05) mg/kg x 10 mértékben 2-(p-trifluormetilorálisan <1,6 fenil )-1 H-peri midin-hidroklorid szubkután <1.6 2-(p-trifluormetoxifenil)-1 H-peri.midin-hidro fluorid orálisan 12,5 2-(p-th fluormetiltiofenil)-1 H-perimidin-hidroklorid orálisan 50 28-29. példák Graft-versus-host (GVH) reakció Ennél a kísérletnél rokon (C57BL) egér-lépsejteket fecskendezünk be Fj hibrid törzsbeli (C57BL x C3H) egerekbe. A befogadó egerek nem vetik ki a befecskendezett lépsejteket, mivel a hibrid az azonos fajtán belüli (homozygous) C57BL rokon antigéneket „saját” sejtként fogadja el. A befecskendezett sejtek azonban reakciót keltenek a befogadó alany szövetében az idegen C3H rokon antigéneknek köszönhetően. Ennek következtében a befogadp alany lépe megnagyobbodik. Az immunszuppresszió gátolja vagy csökkenti ezt a nagyobbodást. így a lép súlya a GVH reakció mértékét és az immunszuppresszió hatására bekö vetkező csökkenést mutatja. A Simonsen-féle eredeti módszer módosított változatát alkalmaztunk [Ann. N. Y. Acad. Sei. 73 :834, (1958)]. A lépsejtek nagymérvű növekedését észleltük anélkül, hogy a Úp általában alkalmazott kézi foszlatását végeztük volna, a foszlatáshoz fordított vágókésekkel ellátott Waring-féle keverőket használtunk. Kétszer hát másodpercig kevertük a lépet (25 rész C57BL lép 25 ml sóoldatban). Ez az idő elegendő ahhoz, hogy a sejteket megszabadítsuk a kötőszövettől. Ez utóbbit szűréssel elkülönítettük különböző vastagságú selyemszöveten. Az ily módon készített sejt-szuszpenáót szabványosítottuk egy Levy-Hausser-féle kamrás számláló segítségével úgy, hogy 6 x 108 magsejtet tartalmazzon ml-ként. Tíz darab 16-18 grammos C57BLxC3H törzsbeli egérből álló csoportok mindegyik tagjának intraperítoneálisan 1 ml donor sejtszuszpenziót fecskendeztünk be. A sejtek befecskendezése előtt 3 nappal kezdtük a kezelést orálisan vagy szubkután 0,2 ml mennyiséggel és a kezelést naponta 13 napon át folytattuk. A kontroli-állatok csak sejteket és vivőanyagot kaptak. Ezután a lépet kivettük és megmértük 10 nappal a sejtek befecskendezése után. Az eredményeket mg lép/g testsúly értékben fejeztük ki. Mivel a rokon, például C57BLxC3H, sejtek befecskendezése a befogadó egerekben kismértékű lépnövekedést okoz, az ilyen állatok lépének a súlyát használtuk a GVH komponens 100%-os elnyomásának a meghatározására az immunszuppresszív vegyületek által kifejtett gátlás százalékában kifejezve. A számítási módot egy hivatkozási immunszuppresszív vegyülettel kezelt egerek példáján mutatjuk be. Hivatkozási mg lép/g Százavegyület testsúly . /I T- + lékos , , ++ 1 -(6-metoxi-2-benzotiazolil)-3-fenilkarbamid (cf. J. Med. Chem. 12. 1016-1018, ' 1969) 12,5 mg/kg x 13 (orálisan 6,86 + 0,80+++ 74 nincs (GVH kontroll) ll,55 ± l,0l 0 nincs (szin. kontroll) 5,20 ± 0.37 300 nincs (normál kontroll) 4,l6±0,l7 — + átlagértékek 5 egér-csoportból (GVH kontroli-kezeit) ++----------------------------------x = százalékos gátlás GVH kontroliszín. kontroll) +++ p<0,01, GVH kontrollal összehasonlítva A gyakorlatban azt találtuk, hogy mind a szín. (rokon) kontroll, mind a normál kontroll csak kissé változik kísérletről kísérletre, egy összetett értéket (4,8) használtunk a számításnál, amelyet négy különálló rokon kontroli-csoportból/ mint 20 egérből álló csoportból, származtattunk le. A graft-versus-host-reakcióban az (I) általános képletű vegyületekkel kapott eredményeket a III. táblázatban foglaljuk össze. + (5,20 ± 0,37, 4,99 + 0,39, 4,42 + 0,13, 4,66 + 0,12) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
