178126. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4- spektinomicilamin és fiziolófiailag elviselhető sói előállítására
5 178126 6 Legkisebb gátlási koncentráció, ßg/ml 4R-spek-Spektinomitinocilamin micin Staphylococcus aureus SG 511 5 (2,5) 20 (10) Streptococcus Aronson Escherichia coli 5 10 ATCC 9637 20 (10) 40 (20) Pseudomonas aeruginosa Serratia marcescens 40 (20) 160 (80) ATCC 13 880 Klebsiella pneumoniae 10 20 ATCC 10 031 10 (5) 20 (10) Proteus mirabilis 10 10 Proteus vulgaris 5 10 A zárójelben azok a töménységek szerepelnek, amelyeknél a növekedés csökkenése már felismerhető, de a növekedés még teljesen nem szűnt meg. A két hatóanyag akut toxicitását úgy határoztuk meg, hogy laboratóriumi kísédeti fehéregereknek perorálisan és szubkután növekvő adagokban beadtuk a hatóanyagokat. LD50 azt az adagot jelenti, amelynek beadása után az állatok 50%-a 8 napon belül elpusztult. Ebben az esetben mindkét hatóanyag LD5 0 értéke 5 g/kg-nál nagyobb volt, 5 g/kg-nál egyik hatóanyag esetében sem pusztult el egy állat sem. Szubkután injekció után a két hatóanyag LD50 értéke 1000mg/kg felett volt, így gyakorlatilag nem toxikusak. Példák a kiindulási anyagok előállítására: A) példa Spektinomicin-benziloxim 6 g (0,012 mól) spektmomicin-dihidroklorid-pentahidrátot és 3 g O-benzilhidroxilamint 25 ml víz és 25 ml metanol elegyében feloldunk. Az oldatot éjszakán át keverjük, bepároljuk, a maradékot kevés vízmentes etanolban feloldjuk, és annyi étert adunk hozzá, hogy az oldat zavarossá váljék. 5,0 g (83%) színtelen port kapunk, amely 175°C-on bomlik. Rf-értéke 0,8 (kovasavgélen, kloroform/metanol/tömény ammóniumhidroxid 20 : 20 : 3 arányú elegyével). NMR-spektruma (oldószer: CD3OD): ppm: 1,3 (dublett, 3H=2—CH3—) 2,8 (dublett, 6H á-N-CH3) 4,65 (szingulett, 1H â lOaH) 5,2 (szingulett, 2H, = benzil-CH2) 7,4 (szingulett, 5H ^ fenil). A szabad vegyületet úgy állíthatjuk elő, hogy a dihidroklorid vizes-metanolos oldatát ioncserélőn [Dowex 2x8 (OH*)] addig reagáltatjuk, amíg a pH maradandóan 10,4. Színtelen kristályokat kapunk, olvadáspontja 86-106 °C. A fentiekkel analóg módon állítottuk elő az alábbi kiindulási vegyületeket: a) 6,8-bisz(benzoiloxi-karbonil)-spektinomicinoximot, 6,8-bisz(benziloxi-karbonil)-spektinomicin és hidroxilamin reagáltatásával, Rf-értéke: 0,38 (kovasavgélen, kloroform/metanol = 9 : 1). A C30H37N3Om (615,6) képlet alapján: Számított: C = 58,52%, H = 6,06%, N = 6,82%, Talált: C = 58,00%, H=6,21%, N = 6,65%. A 6,8-bisz(benziloxi-karbonil)-spektinomicin kiindulási vegyület a szakirodalomból ismert [J. Amer. Chem. Soc., 8^2657 (1963)]. b) 6,8-bisz(benziloxi-karbonil>spektinomicin-metiloximot, 6,8-bisz(benziloxi-karbonil)-spektinomicin és O-metil-hidroxilamin reagáltatásával, Rf-értéke: 0,40 (kovasavgélen, kloroform/metanol - 9 :1). c) Spektinomicin-benzhidrazon-dihidrokloridot spektinomicin-dihidroklorid-pentahidrát és benzoilhídrazin reagáltatásával. 180°C-on bomlik. Rf-értéke: 0,35 (cellulózon, butanol/metanol/víz = 90 : : 25 :20). d) Spektinomicin-acethidrazon-dihidrokloridot, spektinomicin-dihidroklorid-pentahidrát és acetilhidrazin reagáltatásával. 160-180 °Con bomlik. Rf-értéke: 0,29 (cellulózon, butanol/metanol/víz = 20 : 40 : : 20). B) példa 6,8-bisz(f3^3j3-Triklór-etoxi-karbonil)-spektinomicin-benziloxim 6 g (0,008 mól) 6 3-bisz(^^^-triklór-etoxi-karbonil>spektinomicint és 1,5 g (0,01 mól) O-benzilhidroxilamin-hidrokloridot 40 ml dioxán és 40 ml víz elegyében feloldunk. 4 n nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával a pH-értéket 3—4-re állítjuk be. 18 (kán át szobahőmérsékleten keverjük a reakciókeveréket, és ezután, keverés közben, 150 ml vízbe öntjük, majd etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist megbántjuk, és bepároljuk. 6 g színtelen terméket kapunk (93%). Rf-értéke: 0,30 (kovasavgélen, kloroform/metanol = 9 : 1). NMR-spektruma (oldószer: deuterokloroform): ppm: 1,35 (dublett, 2H, 2-CH3), 3,15 (dublett, 6H, -N-CH3), 4.7 (szingulett, 1H, lOaH), 4.8 (széles szingulett, 2H, -CH2CC13), 5,2 (szingulett, 2H, benzü-CH2), 7,4 (szingulett, 5H, fenil). A 6,8-bisz(/3^^-triklór-etoxi-karbonil)-spektinomidn kiindulási anyag a J. Antibiotics, XXVIII. kötet, 140. oldalán (1975) a 6,8-bisz(benziloxi-karbonil)-4-dihidro-spektinomicin előállítására megadott módszer szerint előállítható spektinomicinből és klór-hangyasav-0J?,/3-triklór-etil észterből. Rf-értéke: 0,26 (kovasavgélen, kloroform/metanol2 11 : 1). A B) példával analóg módon az alábbi vegyületeket állítottuk elő: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
