178039. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új aminoglikozid-származékok előállítására
15 178039 16 Komponens Mennyiség grammban szójababliszt 1 kazeinhidrolizátum 0,25 kalcium-karbonát 0,5 glükóz 1 nátrium-klorid 0,5 ammónium-klorid 0,167 víz = 100 ml térfogathoz szükséges mennyiségben. A tenyészetet a jelzett időn át 28 °C-on tarjuk rázatás közben. Ebből a tenyészetből 10%-ot oltóanyagként hozzáadunk a fenti összetételű táptalajjal egyező összetételű, de milliliterenként 0,025 g 2,4-didezoxi-sztreptamin-dihidrokloridot tartalmazó 15 táptalajhoz. A tenyésztést ezután Erlenmeyer-lombikokban 28—30°C-on forgó rázatógépen és jó levegőztetés közben végezzük. Az ezután következő előállítási és tisztítási 20 lépések pontosan megegyeznek az 1. példa a) részében ismertetettekkel. Ha a kapott 6-dezoxi-paromomicint az 1. példában ismertetett módon papírkromatográfíásan tisztítjuk akkor megállapíthatjuk hogy a 6-dezoxi- 25 -paromomicin Rf értéke “0,30. Összehasonlítási célokból megemlíthetjük, hogy azonos kromatográfiás körülmények között a paromomicin Rf értéke 0,27. Whatmann 3MM márkanevű kromatográfiás papi- 30 ron metanol és ammónium-hidroxid 4 :1 arányú elegyét futtatószerként használva meghatározzuk a 6-dezoxi-paromomicin epimerjeinek, azaz a 6-dezoxi-paromomicin I-nek és II-nek az Rf értékét, összehasonlítási célokból a paromomicin megfelelő 35 epimerjeinek Rf értékeivel együtt. Az eredmények az alábbiak: Rf 6-dezoxi-paromomicin I 0,34 6-dezoxi-paromomicin II 0,275 paromomicin I 0,3 paromomicin II 0,22 4. példa 3’,4’-Didezoxi-neomicin epimerkeverékének és származékainak előállítása 50 a) A III általános képletű gentaminok keverékének előállítása A cím szerinti keveréket kereskedelmi forgalomban kapható gentamin-szulfátból állítjuk elő. Ezt a 55 sót először szabad bázissá alakítjuk, majd bepároljuk, amikor is olajat kapunk. Ezután metanolos sósavoldatot (amelyet úgy kapunk, hogy száraz metanolhoz sósavgázt adunk) adunk ehhez az olajhoz, majd a kapott oldatot visszafolyató hűtő 60 alkalmazásával 2 órán át forraljuk. Ezután a metandos sósavoldatot vákuumban lehajtjuk, majd a visszamaradó olajat kis mennyiségű vízzel felvesszük és az így kapott oldatot Amberlite IRA—400 márkanevű gyantát tartalmazó oszlopon 65 bocsátjuk át, amikor is a kívánt gentaminokat kapjuk szabad bázis formájában. Az itt gyűjtött különböző frakciókat szárazra pároljuk, majd metil-garoszaminidre és gentaminkeverékre szeparáljuk szilikagélen végzett kromatografálás útján, eluálószerként metanol, kloroform és ammónium-hidroxid 1:1:1 arányú elegyét használva. E kromatográfiás elkülönítési lépés során a metil-garoszaminid Rf értéke 0,8, míg a gentaminkeveréké 0,2. b) 3’,4’-Didezoxi-neomicin keverékének és származékainak előállítása Lombikban D“ Streptomyces rimosus forma paromomycinus ATCC—21484 törzset tenyésztünk 2—3 napon át az alábbi összetételű, előzetesen pH 7,5-re beállított táptalajon: Komponens Mennyiség grammban szójababliszt 1 kazeinhidrolizátum 0,25 kalcium-karbonát 0,5 glükóz 1 nátrium-klorid 0,5 ammónium-klorid 0,167 víz = 100 ml-hez szükséges mennyiség A tenyésztést a jelzett időn át 28 °C-on rázatás közben végezzük. Ezután ebből a tenyészetből 10%-ot oltóanyagként hozzáadunk az előzőekben említett táptalajjal azonos összetételű, de még az a) lépésben előállított gentaminkeverékből 50 pg-ot (ml-enként) is tartalmazó és pH 7,2-re előzetesen beállított táptalajhoz. A tenyésztést ezután Erlenmeyer-lombikokban 30 °C-on 5 napon át forgó rázatógépen jó levegőztetés közben végezzük. A 3’,4’-didezoxi-neomicin epimerkeverékének és származékainak így kapott nyers keverékét ezután Whatmann 3MM márkanevű papíron futtatószerként metanol és ammónium-hidroxid 4 :1 arányú elegyét használva tisztítjuk. A 3’,4’-didezoxi-neomicin epimerkeverékének és származékainak helyzetét úgy tesszük láthatóvá, hogy a papírt 0,25%-os vizes nátrium-hipoklorit-oldattal, majd vízmentes etanollal és ezután 1% oldható keményítőt és 1% kálium-jodidot tartalmazó vizes oldattal kezeljü!, az egyes kezelések között levegőn végzett szárítást alkalmazva. A kapott termék Rf értéke 0,25. összehasonlítási célokból megjegyezzük, hogy a kiindulási anyag (vagyis a gentaminok III általános képletű keveréke) Rf-értéke azonos módon vizsgálva 0,5—0,7. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az I általános képletű vegyületek - ahol Rf és R2 hidrogénatomot vagy aminometilcsoportot (-CH2NH2 csoportot) jelentenek, és jelentésük egymástól eltérő, továbbá 8
