178004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új enkefalin származékok előállítására
3 178004 4 I. táblázat I képletü vegyületek és H2N-terminálisú analógjainak normorfmra vonatkoztatott opiát aktivitása tengeri malac bél-preparátumon (GPI) és egér ondóvezeték-preparátumon (MVD) normorfin aktivitása = 1) A pepiid N-terminális aminosavrésze nélkül: N-terminális aminosavrész: H2N—C(NH)-Tyr H—Tyr A—Gly—Phe—B GPI8 GPIb MVDC Gpiab MVDC D—Met—Gly—Phe —Pro-NH2 823 173 25 8 8 D—Met—Gly—Phe—NH2 211 79 21 17 4 D—Nle-Gly-Phe-NH2 126 79 18 22 8 D—Nie—Gly—Phe—Pro—NH2 79 21 17 12 10 aGPI teszt Kosterlitz és Watt szerint [Br. J. Pharmacol., 33, 266 (1968)] bGPI teszt Kosterlitz és munkatársai szerint [Br. J. Pharmacol., 39, 398 (1970)] CMVD teszt Hughes és munkatársai szerint [Br. J. Pharmacol., 53, 371 (1975)] a morfint meghaladó fájdalomcsillapító hatást mutatnak a D’Amour-Smith-féle [J. Pharm. Ther., 72, 74 (1941)] tesztben szisztémás adás mellett is. Vizsgálataink szerint az I általános képletű ve- 25 gyületek szelektív módon változtatják meg az amygdala centrális magának katecholamin-tartalmát. Mivel e magcsoport nagy enkefalin-tartalommal és opiátrecep tor-sűrűséggel rendelkezik, és nem a fájdalomérzetet specifikusan befolyásoló rendszerek 30 része, várható, hogy az I általános képletű vegyületek az alábbi funkciókat befolyásolják specifikusan: táplálékfelvétel, emocionalitás, szociális viselkedés illetve tanulási- és memória folyamatok. A fentiek alapján a találmány eljárás I általános 35 képletű — ahol Tyr, Gly, Phe, A és B jelentése a fenti — új enkefalin-származékok előállítására, amely abban áll, hogy a peptidkémiában szokásos módon — lépésenként vagy fragmenskondenzációval — felépített megfelelő aminosav sorrendű és 40 terminális amino-csoportot tartalmazó tetra- vagy pentapeptidek terminális amino-csoportját önmagában ismert módon guanidinocsoporttá alakítjuk. A szerves kémiai gyakorlatban az amino-csoport guanidinocsoporttá alakítására több módszer isme- 45 retes. Például, reagáltathatjuk az amino-vegyületet S-metil-izotiokarbamiddal vagy O-metü-izokarbamiddal illetve l-amidino-3,5-dimetil-pirazollal. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint úgy járunk el, hogy az I 50 általános képletnek megfelelő aminosav sorrendű peptidet 1,1-2,0 mólekvivalens l-amidino-3,5-dimetil-pirazol-acetáttal reagáltatjuk 1,0-1,1 mmól/ml töménységű vizes vagy vízmentes rövídszénláncú alkanol-ddatban 1,1-2,0 mólekvivalens trialkilamin 55 jelenlétében 20—80*0 hőmérsékleten, a reakció végén az oldatot bepároljuk, és az N-terminálisán guanidino-csoportot tartalmazó peptidet elkülönítjük, amely minden esetben acetát-hidrát-só formájában képződik. 60 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban az Rf értékeket szilikagél (Kieselgel G, Reanal, Budapest) vékonyrétegkromatográfiával határoztuk meg az alábbi oldószerekben: ' 65 1. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 480 : 20 : 6 :11 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 240 :20 :6 :11 3. etilacetát-piridin-ecetsav-víz — 60 :20 :6 :11 4. ldoroform-metanol — 9:1 5. metilén-ldorid-25%-os vizes ammónia-metanol — 12 :3 :8 1. példa Amidin o-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenilalanil-L-prolin-amid-acetát-hidrát előállítása (I képletben A jelentése D-metionin-gyök és B jelentése L-prolin-amid-csoport) 1. lépés: l-amidino-3,5-dimetil-pirazol-acetát 20,1 g (100 mól) l-amidino-3,5-dimetil-pirazol-nitrátot [Thiele és Dralle: Ann., 302, 294 (1898)] 110ml In nátrium-hidroxidban és 200ml metilén-kloridban keverés közben feloldunk. A fázisokat elválasztjuk, a szerves fázishoz vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 6 ml (100 ml) ecetsavat adunk, és az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. A kristályos maradékot dietiléterben szuszpendáljuk, szűrjük, és dietiléterrel mossuk, majd szárítjuk. 18,25 g (92%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 114—116 *C. Elemzési eredmény a CgH, 2ö2N4 (198,2) képletre vonatkoztatva: számított: C =48,47%, H =7,12%, N =28,27%, talált: C =48,6%, H =7,1%, N =28,5%. 2. lépés: amidino-L-tirozil-D-metionil-glicil-L-fenüalanil-L-prohn-amid-acetát-hidrát 1,45 g (2 mmól) L-tirozil-D-metionil-glicil-L- fenilalanil-L-prolin-amid-acetát-trihidrátot (858 453 számú belga szabadalmi leírás) és 0,5 g (2,52 mmól) 1 -amidino-3^-dimetil-pirazol-acetátot (1.* példa, 1. lépés) 2 ml etanolban feloldunk, hozzáadunk 2
