177889. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B l2 vitamin aktivitású fermentlevek többirányú feldolgozására
5 177879 6 zott só savmaradékát tartalmazó erős ásványi savval olyan pH-értékre savanyítjuk, hogy a teljes mennyiségű fermentlé hozzáadása után az elegy pH-ja a fémhidroxid leválási pH-értéke alatt maradjon. Amennyiben a feldolgozandó fermentlé kisebb puffer kapacitással rendelkezik, és az alumíniumsó oldatának hozzáadása után a kívánt savas pH-érték beáll, úgy eltekintünk az ásványi savak alkalmazásától. A műveletet 2,5 és 6,9 közötti, előnyösen 3,0 és 6,0 közötti pH-értéken végezzük. Előnyösen eljárhatunk úgy is, hogy a fermentlé és az alumíniumsó oldatát folyamatos üzemű csőreaktorba vezetjük. A csapadékos elegyet ezután tömöri tjük: célszerűen növelt gravitációs térbe (szeparátor, centrifuga) juttatjuk, és a levált biomasszát elkülönítjük. A kapott biomasszát vagy közvetlenül, vagy kívánt esetben alkálifém szilikát oldat hozzákeverése és a pH 6,0-6,5 értékre történő állítása után megszárítjuk. A nyert száraz termék a biomassza kezelésétől és szárításától függően finom por vagy granulált formájú, amely standardizálva takarmánykiegészítőként közvetlenül felhasználható. A szárított termék kívánt esetben extrakciós módszerrel további feldolgozásra alkalmas: a kivonatból kívánság szerint egyszerű technológiai lépésekkel, kis térfogatban dolgozva, könnyen kristályos B12-koenzimet, Bí2-vitamint, hidroxokobalamint stb. nyerhetünk. A kivonatolás után visszamaradt anyagot — amely még sok aspecifikus hatóanyagot, fehérjét, kobalamin maradékot stb. tartalmaz — hígítóanyagként az elsődlegesen keletkezett koncentrált tennék standardizálásához felhasználhatjuk. Ezzel az eljárással tehát egy olyan feldolgozási technológiát sikerült megadnunk, amellyel a fermentlé öszszes hasznosítható komponense kinyerhető, illetve recirkuláltatható. A találmány szerinti eljárás főbb előnyei az alábbiakban foglalhatók össze: 1. Feleslegessé válik kétféle fermentlé-feldolgozási gyártástechnológia alkalmazása, külön a kristályos B)2- vitamin és származékai, illetve külön a takarmánykiegészítő előállítására, mivel a találmány szerint kapott termék közvetlenül takarmánykiegészítőként használható, bomlás veszélye nélkül tárolható, és kereskedelmi igény esetén extrakcióval Bi2-koenzimmé és egyéb kristályos bioaktív termékekké tovább feldolgozható. A kivonatot kívánt esetben nukleofil reagensekkel szulfito-, nitrito-, tiocianáto-, tioszulfáto-, cianáto- vagy ciano-kobalaminná alakítjuk, melyek néhány technológiai lépés után már kristályosíthatok, szemben az eddigi hosszadalmas, sok veszteséget és bomlást okozó rendkívül költséges eljárásokkal. 2. Az eljárásunknál alkalmazott gyengén savanyú közeg a biomasszát stabillá teszi, autolízis benne nem megy végbe, továbbá a sejtekbe zárt kobalamin-koenzimek fénytől védettek, így a nagy volumenű feldolgozás különleges körülmények biztosítását (pl. fényvédelem) nem igényli. 3. Feleslegessé.válik továbbá a kristályos termékek előállításához a korábbi eljárásoknál szükséges nagy mennyiségű import vas-só és mészhidrát alkalmazása. 4. Környezetvédelmi szempontból is igen előnyös jelen eljárásunk alkalmazása, mert: — a baktériumtestek feltárásához és extrakciójához nátrium-cianidot egyáltalán nem használunk. — nincs szükség a több 100 m3-es nagyságrendű fermentlé derítéséhez használt nagy volumenű cianid tartalmú vas(III)-hidroxid csapadék megsemmisítésére, — nincs szükség a Bi2-vitamin kinyerése után visszamaradó cianid tartalmú több 100 m3 térfogatú lé költséges ciánmentesítésére. 5. Műveleti szempontból is előnyt jelent eljárásunk alkalmazása, mert a sűrítménnyel, illetve por alakú termékkel történő műveleti lépések igen kis térfogatban elvégezhetők. Nem szükséges több 100 m3 nehezen szűrhető fermentlé keretes szűrőprésen való átnyomása, ezzel a további lépések munkaerőigénye is lényegesen lecsökken. Az egyszerű technológiai eljárás a termékek kinyerési hatásfokát szignifikánsan megnöveli. A találmány szerinti eljárás értelemszerűen alkalmazható egyéb levek feldolgozására is, így az egyes vitaminok, enzimek vagy a takarmányfehérje előállítását célzó, mikrobiális eredetű levek termékeinek kinyerésére. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy igényünket a példákra korlátoznánk. 1. példa 10 liter metanobaktériumos fermentlevet, melynek B12- és faktor III. koenzim tartalma papírkromatográfiás elválasztást követő kolorimetrikus értékeléssel öszszesen 213 mg, keverés közben 170 ml 10%-os vizes alumínium-klorid-oldathoz öntünk, majd gondosan átkeverjük. Az elegy pH-ja 4,8. Rövid ülepitést követően a csapadéktól elvált vizes fázist dekantáljuk, majd a kb. V3 térfogatrésznyi csapadékos maradékhoz keverés közben addig öntünk 30%-os vizes vízüvegoldatot, míg a keverék pH-értéke 6,0—6,5 között állandósul. Ehhez kb. 42 ml vízüveg-oldat szükséges. Ezt követően a csapadékot poharas centrifugán tömörítjük, majd a poharakban maradó csapadékot fémtálcára átszedjük, és állandó légáramlat biztosítása mellett, 75 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten megszárítjuk. 117,0 g világosszürke színű, granulált formájú maradékot kapunk, melynek B12- és faktor III. koenzim tartalma 208,26 mg, mely 1,780 pg/g koncentrációnak felel meg. Kitermelés: 97,8%. 2. példa 10 liter Propionibacterium Shermannii steril tenyészetének fermentlevét, melynek Bi2-koenzim tartalma papírkromatográfiás elválasztás és kolorimetrikus értékeléssel összesen 305 mg, keverés közben 170 ml 10%-os vizes alumínium-klorid oldathoz adagoljuk. A csapadékos oldatot poharas centrifugán tömörítjük, a csapadékot fémtálcára szedjük és állandó légáramlat biztosítása mellett, 75 °C-t meg nem haladó hőmérsékleten megszárítjuk. 134,0 g világosbarna színű, darabos maradékot kapunk, melynek B32-koenzim tartalma 248,3 g, mely 1,853 pg/g koncentrációnak felel meg. Kitermelés: 81,4%. 3. példa 100 liter metanobaktériumos fermentlevet, melynek Bj2 és faktor III. koenzim tartalma összesen 1,895 g, állandó keverés közben folyamatos üzemű laborméretű 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
