177888. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentációban keletkező anyarozsalkaloidok mennyiségeinek és arányának szabályozására
7 177888 8 juk, majd 24 °C hőmérsékleten 300-as löketszámú rázóasztalon 3 napig inkubáljuk. A kapott tenyészet 10 ml-ét továbboltjuk 100 ml T 25 táptalajra, majd 5 napon át 20 °C hőmérsékleten az előző tenyésztéshez hasonlóan rázóasztalon inkubáljuk. A fermentáció 20. órájában a fermentléhez prekurzorként 0,5 g treonint adunk. Az ötödik napon az összalkaloid-szint 1200 y/ml, az ergokornin és ergokriptin szintet az 1. példában megadott módon meghatározva a következőt találtuk: Az ergokomin szint 260 y/ml, az a-ergokriptin szint 140 y/ml; a B-ergokriptin mennyisége 80 y/ml. Ergokominin-kriptinin együtt 130 y/ml. A GK táptalaj összetételét az 1. példában megadtuk. Az Sí-agar-táptalaj annyiban különbözik azsl. példa szerinti St folyékony táptalajtól, hogy ahhoz literenként 25 g agar-port (Difco) is adunk, és a táptalajt az agar hozzáadása után felfőzzük, majd 6 ml-es adagokban kémcsövekbe töltjük, sterilezzük és ferdítjük. AT 25 táptalaj összetétele a következő: szacharóz 300,0 g citromsav 15,0 g élesztőkivonat 1,0 g kálium-dihidrogén-foszfát 0,5 g magnézium-szulfát 0,5 g ammónium-hidroxid ad pH 5,2—5,3 víz ad 1000 ml A táptalajt 100 ml-es adagokban lombikokba töltjük, és sterilezzük. 4. példa A 3. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy prekurzorként nem treonint, hanem 0,5 g homoszerint adunk a fermentléhez. A fermentáció 5. napján az összalkaloid-szint 880 y/ml, a fermentlé 220 y/ml ergokomint és 150 y/ml a-ergokriptint tartalmaz, a ß-ergokriptin mennyisége 80 y/ml. Ergokorninin-ergokriptinin együttesen 180 y/ml. 5. példa A 3. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy prekurzorként treonin helyett 0,05 g homociszteint adunk a fermentléhez. A fermentáció 5. napján az összalkaloid-tartalom 700 y/ml, a fermentlé 190 y/ml ergokomint és 85 y/ml a-ergokriptint tartalmaz, a ß-ergokriptin mennyisége 90 y/ml, és az ergokominin-ergokriptinin együttesen 150 y/ml. 5 6. példa MNG 00186 számon deponált Claviceps purpurea mutánstörzs St agar-táptalajonnőtt tenyészetét 500 ml-es 10 Erlenmayer lombikban levő 100 ml GK táptalajra oltjuk, majd 24 °C hőmérsékleten 300-as löketszámú rázóasztalon 4 napig inkubáljuk. Az így kapott tenyészet 10—10 ml-ét továbboltjuk 8 db 100—100 ml St táptalajt tartalmazó lombikba, és a tenyészeteket 7 napon át 15 24 °C hőmérsékleten rázott kultúrában a fent leírt körülmények között fermentáljuk. Négy lombikhoz nem adunk prekurzort, 4 lombikhoz pedig a fermentáció 24. és 48. órájában esetenként 2 ml vízben oldott 0,02 g metionint adunk. A 7. napon a fermentációt leállítjuk, 20 és a kontroll (prekurzor nélküli) fermentleveket egyesítjük, és alkaloidtartalmukat meghatározzuk. Átlagos ergokomin-tartalom 80 y/ml, az a-ergokriptin-tartalom 15 y/ml és a ß-ergokriptin-tartalom 30 y/ml. A prekurzor-adagolással készült fermentleveket szin- 25 tén egyesítjük, és alkaloid-tartalmukat meghatározzuk. Átlagos ergokomin-tartalom 250 y/ml, az a-ergokriptin-tartalom 150 y/ml és a ß-ergokriptin-tartalom 100 y/ml. A GK és St táptalaj összetételét az 1. példában, az 30 St agar-táptalaj összetételét a 3. példában ismertettük. Szabadalmi igénypontok 35 1. Eljárás szaprofita körülmények között főként ergokomin, a- és ß-ergokriptin termelésére képes Claviceps purpurea variáns-törzsek által termelt alkaloidok szintjének és egymáshoz képesti arányának szabályozására, azzal jellemezve, hogy az önmagában ismert fermentá- 40 ciós eljárásnál szabályzóként az izoleucin bioszintézisútjának vegyületét, előnyösen metiloxálecetsavat, a-keto-vajsavat, treonint és/vagy homoszerint, vagy az izoleucin-képződést biokémiai szabályozás útján serkentő vegyületet, előnyösen homiciszteint és/vagy metionint 45 alkalmazunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az alkaloidtermelést szabályzó vegyületet 0,01—10 kg/m3, előnyösen 0,05—5,0 kg/m3 fermentlé mennyiségben alkalmazzuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 83.6812.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató
