177804. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hormonok és gyógyszerek teljes mennyiségének meghatározására
5 177804 szérumot 350 pl 2 mg/ml koncentrációjú enzim oldattal 30 percig, 35 °C-on reagáltattunk. Ennek az oldatnak 100 pl-éhez 700 pl, milliliterenként 5,2 ng radioaktívan jelzett tiroxint tartalmazó oldatot és 50 pl 7,2 pH-értékű puffer-oldatot adtunk. Ebből az oldatból 350 pl-t adtunk az antitest tartalmú gél 60 mg-jához. Az inkubációs idő 30 perc, a hőmérséklet 22 °C volt. Az elúció 0,5 ml/perc sebességgel 5 percig tartott. Különböző koncentrációjú — 5,10, 20 és 50 ng/100ml —tiroxin-oldatok segítségével egy dózishatás-görbét vettünk fel. Ezeket az oldatokat 350 pl 2 mg/ml koncentrációjú enzim-oldatokkal reagáltattuk 30 percig 35 °C-on. A különböző koncentrációjú tiroxin-oldatok 100— 100 pl-éhez 700 pl, milliliterenként 5,2 ng radioaktívan jelzett tiroxint tartalmazó oldatot és puífer helyett 50 pl null-szérumot adtunk. A kiértékelés alapján a visszanyerés 99%-os volt. 2. példa Tiroxin teljes mennyiségének meghatározása proteinázzal történő enzimatikus hidrolízissel Az 1. példában leírt módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy a pronáz-oldat helyett 2 mg/ml koncentrációjú proteináz oldatot alkalmaztunk. Az alkalmazott szérum 6 mg/100 ml koncentrációjú null-szérum volt. A visszanyerés 98,5%-os volt. 3. példa Kortizol teljes mennyiségének meghatározása pronézzal történő enzimatikus hidrolízissel Az 1. példában leírt módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy 100 milliliterenként 18 pg kortizolt tartalmazó szérumot alkalmaztunk. Jelzett oldatként milliliterenként 0,15 ng radioaktívan jelzett kortizolt tartalmazó oldatot alkalmaztunk. A visszanyerés 98%-os volt. 4. példa Kortizol teljes mennyiségének meghatározása proteinázzal történő teljes hidrolízissel A 3. példában leírt módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy a 100 milliliterenként 6 pg kortizolt tartal-6 mazó szérumot 2 mg/ml koncentrációjú proteináz-oldattal reagáltattunk. A visszanyerés 98%-os volt. A 3. és 4. példában alkalmazott antitestet kortizol- 5 -C3-oximból szintetizáltuk és vegyes-anhidrid segítségével kötöttük az albuminhoz. Az antitestet házinyulak immunizálásával állítottuk elő. 10 5. példa Tiroxin meghatározása pepszinnel történő enzimatikus hidrolízissel 15 Az 1. példában leírt munkamódszerhez hasonlóan dolgoztunk. 100 milliliterenként 18 pg tiroxint tartalmazó szérum 10 ;j.l-éhez 160 txl 0,1 n sósavban oldott, 2 mg/ml koncentrációjú pepszin-oldatot adtunk. 20 A reakciót szobahőmérsékleten, 30 percig végeztük. Ennek az oldatnak 170 pl-éhez 150 pl, milliliterenként 5,2 ng radioaktívan jelzett tiroxint tartalmazó oldatot adtunk. Az egész oldatot ezután az antitest tartalmú gél 60 mg-25 jára vittük fel. Az antitest-gél polimer-mátrixa akrilamidnak és 40 mól-százalék nátrium-metakrilátnak a kopolimerje volt, amelyet 20%-os monomer-oldatból kiindulva állítottunk elő. 30 Az inkubáció 30 percig tartott 22 °C-on. Az elúció 0,5 ml/perc sebességei 5 percig tartott. A visszanyerés 98%-os volt. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás részben-specifikus vagy nem-specifikus kötőfehérjékhez kötött hormonok vagy gyógyszerek, elő- 40 nyösen pajzsmirigy-hormonok, szteroid-hormonok, szívglikozidok, vitaminok, véralvadásgátlók, fájdalomcsillapítók, szalicilátok és triciklusos antidepresszívumok teljes mennyiségének meghatározására a kötőfehérjék enzimatikus hidrolízisével, majd a hormonoknak vagy 45 gyógyszereknek antitesttel való reagáltatásával, és ezután a hormonok vagy gyógyszerek radioimmunológiai meghatározásával, azzal jellemezve, hogy akrilamidpolimerben vagy akrilamid-kopolimerben immobil izált antitestet alkalmazunk. 50 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy polimer-gélbe zárt antitestet alkalmazunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 83.6804.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkű István igazgató
