177657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubszituált piperazinil kinolin-karbonsav előállítására
5 177657 6 1. táblázat folytatása Mikroorganizmusok Gram M. I. C. (ng/ml) Vegy.*' j PPA*’ NA** GM** CBPC« Klebsiella pneumoniae IFO 3512 0,05 I 1,56 1,56 0,20 >200 Salmonella enteritidis HD 604 — 0,78 12,5 12,5 1,56 12,5 Shigella sonnei HD 969 ~ 0,10 1,56 1,56 0,78 1,56 Haemophilus influenzae IID 986 — 0,10 3,13 1,56 1,56 0,39 Neisseria perflava HD 856 — 0,10 1,56 1,56 0,78 1,56 Pseudomonas aeruginosa V—1 — 1,56 12,5 100 0,78 12,5 Ps. aeruginosa IFO 12689-3,13 25 >200 12,5 100 Ps. aeruginosa IID 1210-3,13 50 >200 12,5 100 Ps. aeruginosa IID 1130 — 6,25 25 >200 3,13 200 Seratia marcescens HD 618 0,78 1,56 Ser. marcescens HD 619 0,39 1,56 Ser. marcescens HD 620 0,20 156 ** 1 -Etil-6-fluor-7-(4-metil-1 -piperazinil)-4-oxo-1,4-dihidrok inolin-3-karbonsav *2 PPA: pipemidinsav; NA: nalidixinsav; GM: gentamicin; CBPC: carbenicillin. 2. kísérlet : Akut toxicitás A találmány szerinti vegyület akut toxicitását egereken (ddY törzs, 6 hetes) és patkányokon (Wilstar törzs, testsúly 160—200 g) vizsgáltuk. A megfigyelési időszak 10 nap volt egyszeri szájon át történő beadás után. Az 30 LDjo értéket a Litchfield—Wilcoxon-módszerrel határoztuk meg. Az eredmények a 2. táblázatban láthatók. 2. táblázat. A találmány szerinti vegyület*1 LD50 értékei 35 25 A találmány szerinti vegyület koncentrációi a szérumban szájon át egyszeri 50 mg/kg-os beadás után a 3. táblázatban láthatók. A találmány szerinti vegyület felszívódása gyors, és a csúcskoncentráció a szájon át történő beadás után 1 órával jelentkezik. 3. táblázat. A találmány szerinti vegyület koncentrációja a szérumban szájon át történő egyszeri 50 mg/kg-os beadás után patkányban Allât Beadás módja Nem LD,n mg/kg A beadás óta eltelt idő Koncentráció ptg/ml Egér szájon át hím >4,000 40 0,5 17,4 + 1,13 nőstény >4,000 1 18,4+2,10 Patkány szájon át hím >4,000 2 13,0 + 0,87 nőstény >4,000 3 9,3+0,78 • •------------— ...... 4 5,9+0,41 *1 l-Etil-6-fluor-7-(4-metil-l-piperazinil)-4-oxo-1,4- 45 6 4,1 ±0,26 -dihidrokinolin-3-karbonsav. 3. kísérlet: A találmány szerinti vegyület koncentrációi szérumban szájon át beadott 50 egyszeri 50 mg/kg-os adag után patkányokban A találmány szerinti vegyület koncentrációját szérumban mikrobiológiai meghatározással állapítottuk 55 meg. Agár táptalajt megmelegítünk, és megolvasztjuk. Escherichia coli NIHJ JC—2-t adunk a megolvasztott agárhoz, és alaposan elegyítjük, majd az elegy 5 ml-ét Petri-csészébe töltjük. A megszilárdult agarra penicillinhengereket teszünk, és a hengert megtöltjük szérum- 60 mintával. Az agarlemezt 20 órára 37 °C-os inkubátorba tesszük. Utána lemérjük az inhibiciós zóna átmérőjét. A szérumból a találmány szerinti vegyületnek a patkányba való beadása után 0,5, 1, 2, 3, 4 és 6 órával veszünk mintát. 65 4. kísérlet: A találmány szerinti vegyület védő hatása Klebsiella pneumoniaevel és Escherichia colival való szisztemikus fertőzés ellen egerekben A szisztemikus fertőzést úgy végezzük, hogy hím egereket (törzs: SLC-ICR, testsúly: 20 g) intraperitonealisan beoltunk 0,5 ml 5% mucintartalmú agy-szív-Ievesben (Eiken) szuszpendált Klebsiella pneumoniae GN6445-tel vagy Escherichia coli NL4707-tel. A találmány szerinti vegyületet, illetve a nalidixsavat és a pipemidinsavat 0,5%-os karboxi-metil-cellulóz-oldatban szuszpendáljuk. A vizsgálati anyagok mindegyikét szájon át két alkalommal adjuk be az egereknek, közvetlenül az oltás után és az oltást követően 6 órával, és az egyes vegyületek terápiás hatását a túlélési arányból ítéljük meg. A vegyü-3
