177478. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő mumpsz-vakcika előállítására
3 177478 4 ciális veszély, hogy a rajtuk készített vakcina szennyezett lesz az utóbb említett vírusokkal. Később az is bebizonyosodott, hogy ennek a törzsnek kicsi az immunizálóképessége. Hasonló veszélyekkel jár a Copelovic és munkatársai által izolált törzs, illetve a „Leningrad 1” és a „Leningrad 2” törzsek alkalmazása, minthogy ezeket is csirkeembriókon izolálják. A „Leningrad 3” törzs ugyan adaptálva van japán fürjből elkülönített fibrocyta-sejttenyészetre, pillanatnyi széleskörű felhasználását azonban technológiai, tudományos és szervezésbeli nehézségek gátolják. Az úgynevezett „Leningrad 3 — Pankov” törzsből — amely még újszülött kölyökkutyák veséjére is adaptálva van — előállított vakcina felhasználását megszüntették tudományos eredetű okokra tekintettel. A Jeryl Lynn törzset leukémiamentes madarakból nyert csirkeembriókon, illetve az úgynevezett „aranytojás”-on izolálják, továbbá a vakcinát is ilyen tojásokon állítják elő. Ennek következtében viszont ez a vakcina előállítása rendkívül költséges, éspedig egy immundózis költsége több, mint 2 dollár. Ez a tény gátolja a széleskörű felhasználást. Ugyancsak az említett „aranytojás”-on állítják elő a Towata és Urabe törzsekből nyerhető vakcinát is. Célul tűztük ki tehát olyan eljárás kidolgozását élő mumpsz-vakcina előállítására, amely megfelelően areaktogén, immunogén és epidemiológiailag hatásos vakcina előállítását teszi lehetővé. Azt találtuk, hogy a fenti célkitűzést elérhetjük, ha a vakcinát az úgynevezett „Szófia 26” törzsből állítjuk elő. Ezt a törzset 111. szám alatt 1976. december 7-én a Bulgár Gyógyszerellenőrzési Intézet által gondozott Bulgár Törzsgyűjteménynél (Bulgária, Szófia, VI. Zalmov Bulv. 26) deponáltuk. Elektronmikroszkóp alatt megfigyelve a vírus polimorf, de elsősorban ovális formát mutat. Átlagos mérete 180—300 nanométer, és tisztán kivehető, mintegy 20 nanométer vastag külső héjrétege van. Antigén-tulajdonságait illetően tökéletesen megfelel a Bulgáriában és más országokban izolált más parotitisztörzseknek és az úgynevezett paragrippe-vírusokhoz sorolható. Szobahőmérsékleten hamar elpusztul. Jó stabilizáló hatást fejt ki rá a botjúszérum, szacharóz, zselatin és a fölözött tej. Hosszú ideig eltartható liofilizált állapotban. Ibolyántúli fényre érzékeny. Laboratóriumban liofilizált állapotban —40 ‘C-on tartandó. A találmány szerinti eljárás lényege az, hogy az említett törzset beteg személyből újszülött tengeri malac veséjéből készült szövettenyészeten izoláljuk, majd ugyanezen a sejttenyészeten végzett passzálásokkal legyengítjük és az így kapott vírust önmagában ismert módon élő mumpsz-vakcinává alakítjuk. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbiakban ismertetett módon foganatosítjuk. Járványos íültőmirigy-gyulladásban szenvedő gyerekből a mumpsz-vírust újszülött tengeri malac veséjéből készített sejttenyészeten izoláljuk. A vírust ezután ugyanezen a sejttenyészeten ismételten elvégzett 12—25 passzálással legyengítjük, aminek következtében elveszíti ugyan az emberrel szembeni patogén hatását, de megőrzi immunogén tulajdonságát. A legyengített törzsből a vakcinát ugyanezen a sejttenyészeten, vagyis 3—5 napos tengeri malacok veséiéből készített sejttenyészeten állítjuk elő, éspedig a seji'enyészet egy súlyrésznyi mennyiségére vonatkoztatva 0.01 — 1.00 súlyrész oltóanyagot használunk. Az így fertőzött tenyészetből gyűjtött félkész terméket ezután ampullákba töltjük, majd megfelelő ellenőrzés után liofilizáljuk. A vakcina liofilizálását 48 órán át 50 °C-os bepárlóval végezzük, és a szárítókamrában legfeljebb 76 Pa vákuumot létesítünk, illetve a szárítókamra hőmérsékletét úgy szabályozzuk, hogy a szárítás végére az legfeljebb 25 °C legyen. A végterméket ezután további ellenőrzési műveleteknek vetjük alá. A vakcina az ampullában halványvörös tablettaként jelentkezik, és egy éven belül használandó fel. Felhasználása előtt a vakcinát desztillált vízben oldjuk, majd szubkután 0,5 ml térfogatban injektáljuk, amely mennyiség 1000—10000 fertőző egységet tartalmaz. A találmány szerinti vakcinával végzett immunizálás után nem észlelhető hőemelkedés, illetve nincsenek általános helyi reakciók, illetve tünetek. Egyes esetekben ugyan megfigyelhető volt hőemelkedés, ez azonban a kontrollszemélyeknél is jelentkezett, Vagyis a hőemelkedésnek más volt az oka, legtöbbször a felső légzőtraktus hurutja. A találmány szerinti vakcinával immunizált emberek 95%-ánál antitest mutatható ki, amit vírusok semlegesítő reakciójánál mért átlagos geometriai titer 1:22,6 értéke igazol. A haemagglutináció inhibitálása az immunizált emberek 83,5%-ánál észlelhető, 1:11,3 átlagos geometriai titerrel. Ezek az értékek kedvezőbbek, mint például a korábban említett „Jeryl Lynn” és „Leningrad 3” törzsek esetén elérhető értékek. Ez annyit jelent, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vakcina kiváló posztvakcinális Immorális immunitást teremt, ami megvédi az immunizált embert járványos mumpsz fertőzéstől. A találmány szerinti vakcina kiváló epidemiológiai hatásosságát járványos mumpsz sújtotta helyeken való alkalmazásával, illetve tömeges alkalmazásával bizonyítottuk. Miután a vakcinát járványos mumpsz sújtotta helyeken alkalmaztuk, a járvány hamar félbeszakadt, a megbetegedett egyének száma gyorsan csökkent és a szükséges karantén időtartama csökkenthető volt. így például a járvány átlagosan 30 napon át tartott azokon a helyeken, ahol a vakcinát alkalmaztuk, míg a kontrollhelyeken a járvány időtartama csaknem 120 nap volt. Tömeges alkalmazással is bizonyítottuk a találmány szerinti vakcina igen nagy hatékonyságát. így Plovdiv városában az összes 1 és 12 év közötti és még járványos mumpszon át nem esett gyermeket beoltottuk a találmány szerinti vakcinával, aminek következtében a morbiditás 12—17-ed részére csökkent. A plovdívi területen végzett vizsgálatok tanúsága szerint a vakcina hatásossági indexe 10 fölött van, míg a védelmi koefficiens csaknem 97%. A múltban a járványos mumpsz bizonyos években a halált okozó megbetegedések között az első. második vagy a harmadik helyet foglalta el, míg a vakcinával végzett kezelés után az utolsó helyre került. Korábban a járványos mumpsz adta az összes fertőzések 22.3%-át és a cseppfertőzések 25.8%-áí, míg 1973-ban ezek az értékek 2,9%-ra, illetve 4.6%-ra csökkentek a tömeges beoitás eredményeként. A múltban a 4 vagy több esettel járó járványgócok mennyisege 90% fölött volt, míg a tömeges beoltás után ez az érték 5%-ra csökkent. Az eddig kapott eredmények tehát egyértelműen bizonyítják a járványos mumpsz elleni küzdelemben a találmány szerinti eljárással előállítható vakcina felhasználásának eredményességét. A találmány szerinti eljárás előnyei az alábbiak : A találmány szerinti vakcina ugyanazon tenyészeten állítható elő, amelyen magát a vakcina előállításához használt törzset izoláljuk, ami lényegesen csökkenti a vakcina szennyeződésének veszélyét. A találmány szerinti törzs le-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
