177133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-és helyzetben alfa-aminooxisavat tartalmazó angiotenzin-II-antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
11 177133 12 szárítás és bepárlás után a védett tetrapeptidet (Rf = 0,65) 100 ml 7:3 arányú n-hexán : éter elegy segítségével izoláljuk. Ezt 25 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és 15 perc múlva a szabad tetrapeptidet (Rf =0,65) 150 ml száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és 30-30 ml éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml kloroform : dimetilformamid = 1 :1 elegy ben, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 6,0 g (11,5 mmól) Boc-Tyr-OPFP-t. 15 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, hozzáadunk 0,66 ml N,N-dimetilamino-etilamint, majd 15 perc múlva 30-30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett pentapeptidet (R7 = 0,8) 100 ml éterrel eldörzsölve izoláljuk. Ezután 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk a szabad pentapeptidet (Rf = 0,8) 120 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk, szűrjük és 30—30 ml éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 3,85 g (10 mmól) Boc—Val—OPFP-t. Egy óra múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk, a szokásos módon kirázzuk és a védett hexapeptidet (Rf = 0,82) 100 ml éterrel eldörzsölve izoláljuk. Ezt 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk és 15 perc múlva a szabad hexapeptidet (Rf = 0,55) 150 ml száraz éterrel eldörzsölve izoláljuk. Az így kapott terméket azonnal feloldjuk 40 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 6,0 g (10 mmól) Boc—Arg(Tos)—OPFP-t. 30 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml kloroformban oldjuk és az elegyet 20-20 ml n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett heptapeptidet (Rf = 0,62) 70 ml etanollal eldörzsöljük és leszűrjük. Súlya: 7,5 g (50% a kiindulási Boc-Pro—OPFP-re számítva). Op.: 186-190 °C. 2. lépés Boc—OGly-Arg(Tos)—Val—Tyr—Ile—His—Pro— -Leu-OH előállítása 3,45 g (2,26 mmól) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)—Ile—His(Dnp)—Pro—Leu—ONB-t 10 ml dimetilformamidban feloldunk, hozzáadunk 6,6 ml 2-merkaptoetanolt és két óra múlva 150 ml száraz éter hozzáadásával kicsapjuk a részlegesen védett heptapeptidet, amelyet metanol-éter átcsapással tisztítunk. így 2$ g (93%) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro-Leu-ONB-t kapunk. Rf = 0,12, Rf = 0,26. Ezt 40 ml metanol : ecetsav : viz = 5 :1 :1 elegyben feloldjuk, hozzáadunk 1,0 g 10%-os csontszenes palládiumot és 6 órán keresztül hidrogén gázt buborékoltatunk át az elegyen. A katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk és a maradékot 100 ml éterre! eldörzsöljük, szüljük, 30 ml éterrel mossuk és megszárítjuk. Az így kapott Boc-Arg(Tos)-V tl-Tyr-Ile-His-Pro— -Leu-OH súlya: 2,15 g (89%), R?=0,75, Rf = 0,20. 1,1 g(l mmól) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr—Ile—His—Pro—Leu—OH-t 10 ml 8n sósavas dioxánban feloldunk, és 30 perc múlva a szabad heptapeptidet (Rf = 0,08) 50 ml száraz éterrel kicsapjuk, szüljük és 30 ml éterrel mossuk. Azonnal oldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8 -ra állítjuk, és hozzáadunk 0,54 g (1,5 mmól) Boc—OGly-OPFP-t. 30 perc múlva az oldatot 30 ml kloroformmal hígítjuk, és 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 30 ml etilacetáttal eldörzsöljük és szüljük, majd 10 ml etilacetáttal mossuk. így 1,05 g (86%) Boc-OGly-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH-t kapunk. Rf = 0,23, Rj = 0,40. 3. lépés Védőcsoportok eltávolítása 0,9 g (0,73 mmól) Boc-OGly-Arg(ToS)-Val—Tyr—Ile—His—Pro—Leu—OH-t 5 ml cseppfolyós hidrogénfluoridban feloldunk, és hozzáadunk 1,5 ml • tioanizolt. A reakcióelegyet 1 ß órán át 0 °C-on tartjuk, majd 150 ml száraz éterrel a pepiidet kicsapjuk, 30—30 ml éterrel kétszer mossuk és szűrjük. így 0,55 g (80%) (OGly1, Leu8)-angiotenzin-II-t kapunk, amelyet a leírt módon tisztítunk. R8 =0,33, R? =0,60, Rf7 =0,55, EGlu = 1,18, Aminosav-analízis: Pro: 1,0 (1), Val: 1,0 (1), Ile: 1,0 (1), Leu: 1,1 (1), His: 0,95 (1), Arg: 1,0 (1), Tyr: 0,7 (1). 4. példa (D-a-Aminooxipropionil1, Leu8 )-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc—D—OAla-Arg(Tos)—Val—Tyr—Ile—His— —Pro—Leu—OH előállítására 1,1 g (1 mmól) Boc—Arg(Tos)—V al-Tyr—Ue—His—Pro—Leu—OH-t 10 ml 8 n sósavas dioxánban feloldunk, és 30 perc múlva a szabad heptapeptidet 70 ml száraz éterrel kicsapjuk, szüljük és 20 ml éterrel mossuk. Azonnal feloldjuk 10 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk, és hozzáadunk 0,56 g (1,5 mmól) Boc—D—OAla-OPFP-t. 30 perc múlva az oldatot 30 ml kloroformmal hígítjuk és 20 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 50 ml etilacetáttal eldörzsöljük és szűrjük és 20 ml etilacetáttal mossuk. így 0,95 g (77%) Boc—D-OAla-Arg(Tos)—Val-Tyr-Ile—His-Pro-Leu—OH-t kapunk. Rf = 0,29. 2. lépés Védőcsoportok eltávolítása 0,95 g (0,77 mmól) Boc-D-OAla-Arg(Tos)—Val-Tyr—Ile-His-Pro-Leu—OH-t 4 ml cseppfolyós hidrogénfluoridban feloldunk, és hozzáadunk 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
