177132. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH hatású terc-butilezett triptfént tartalmazó peptidek előállítására
15 177132 16 tott oldatát. A reakcióelegyet 1 órán át -5 és 0°C közötti hőmérsékleten keverjük, majd másnapig 0 °C-on állni hagyjuk. Ekkor az oldatot bepároljuk, a maradékot vízzel eldörzsöljük, a nyers terméket terc-butanol-víz 4 :1 elegyből átkristályo- 5 sítjuk. 1,78 g (73%) védett dekapeptidet kapunk. Op.: 207-209 °C, R4 =0,31. BOC—Ser-Tyr—Ser-Met—Glu(OtBu)—His—Phe-Arg~Trp(2’,5’,7’-tri-tBu)-Gly-Lys(BOC)- 10 -Pro~Val-Gly-Lys(BOC)-Lys-(BOC)-Arg-Arg-Pro—NH2 -tritozilát 0,974 g (0,6 mmól) BOC—Ser—Tyr—Ser-Met—Glu(OtBu)—His—Phe- - Arg—T rp(2 ’ ,5 ’,7 tri—tBu)— 15 -Gly-OH-t és 1,13 g (0,6 mmól) H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)—Arg-Arg-Pro-NH2 -tritozilátot 8 ml dimetilformamidban oldunk, 0,084 ml (0,6 mmól) trietilamint és 0,68 g (0,9 mmól) pentafluorfenol—DCC—3 : 2t) : 1 -komplexet adunk hozzá. 20 óra múlva a kivált DCU-t kiszűijük és a szűrletből a terméket éterrel kicsapjuk. 1,9 g (91%) védett nonadekapeptidamid-tritozilátot kapunk. R4 =0,12. 3. példa [Trp(l ’-tBu)9 ]—ACTHO -19)-NH2 vegyes foszfát-cink komplexe 30 1,00 mg (TrpíT-tBu)9]—ACTH(1—19)—NH2-t, 8,10 mg cinkkloridot. 1,65 mg dinátriumhidrogénfoszfát-víz (l/12)-t és 10,00 mg benzilalkoholt 0,8 ml desztillált vízben feloldunk, majd pH-ját 35 0,6 n nátriumhidroxid-oldattal 8,6 pH-értékre beállítjuk és az oldat térfogatát desztillált vízzel l,00ml-re kiegészítjük. Ily módon csapadékos szuszpenziót kapunk. A csapadékban, amely vegyes peptid-foszfát-cink komplex, a pepiid, a cink-. 40 a foszfát- és a hidroxidion 1 :144:11 :255 mólarányban van jelen. H-Ser-Tyr-Ser-Met~Glu-His-Phe~Arg-Trp(l’-tBu)-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys—Lys—Arg—Arg—Pro-NH2—hexahidroklorid 128 mg (40 M«iol) H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu- 50 -His-Phe-Arg-Trp(r~tBu)-Gly-Lys-Pro—Val—Gly—Lys—Lys-Arg—Arg—NH2-hexaacetátot (amelyet az 1. példa szerinti módon állítottunk elő) és 42 mg (0,5 mmól) ammóniumkloridot 10 ml vízben feloldunk, az oldatot liofilizáljuk, majd a 55 feloldást és liofilizálást még kétszer megismételjük, végül a száraz maradékot 5 ml vízben feloldva 2 x 100 cm-es gélszűrő (Sephadex G 25) oszlopra visszük és desztillált vízzel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. 102 mg nonadekapeptidamid-hexahidrokloridot kapunk. R® = 0,38, peptid-tartalom: 81%, CL-tartalom: számított: 7,1%, talált: 7,0%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-X-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg—Arg—Pro—NH2 j I általános képletű peptidek — ahol X —Trp(l ’-terc-butil)- vagy -Trp(2’,5’,7’-tri-terc-butil)-csoportot jelent — savaddíciós sóinak és komplexeinek az előállítására, ahol az egyes aminosavgyökök a glicin kivételével L-konfigurációjúak, azzal jellemezve, hogy valamely Q—Ser—Tyr—Ser—Met—Glu(OR)—His—Plie— Arg(Q’)—X-Gly—Lys(Q)-Pro-Val—Gly-Lys(Q)— -Lys(Q)-Arg(Q’)-Arg(Q’)-Pro-NH2 II II általános képletű pepiidről — ahol X -Trp(l -terc-butíl)-csoportot vagy -Trp(2’,5’,7’-tri-terc-butilcsoportot jelent, Q azonos vagy eltérő, a peptidkémiában alkalmazott amino védőcsoportokat, Q’ hidrogénatomot vagy azonos vagy eltérő, a peptidkémiában alkalmazott guanidino védőcsoportokat és R a peptidkémiában alkalmazott karboxil védőcsoportot képvisel — a védőcsoportokat erős savval lehasítjuk és a kapott savaddíciós sót kívánt esetben más, gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóvá vagy komplexszé alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a kapott I általános képletű vegyidet gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóját vagy komplexét - ahol a képletben X az 1. igénypontban megadott jelentésű — a gyógy szerkeszítésben szokásos módon, egy vagy több segédanyaggal összekeverjük és gyógyászati készítménnyé elkészítjük. 60 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 824396 - Zrínyi Nyomda, Budapest 8
