177098. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptidil ng-karboxi-L-arginin-aldehid-származékok előállítására
7 177098 8 2. lépés: benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolil-NG-benziloxikarbonil-L-arginin-laktám 8,6 g (22 mól) terc-butiloxikarbonil-NG-benziloxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. példa, 1. lépés végén kapott) 20 ml etilacetátban szuszpendálunk, és 5 °C- on keverés közben hozzáadunk 40 ml 4 mólos etilacetátos sósav-oldatot. A reakcióelegyet jeges vízhűtés közben 30 percig keverjük, majd 100 ml hűtött etilacetáttal hígítjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, etilacetáttal mossuk, és kálium-hidroxid mellett vákuum exszikkátorban szárítjuk. Az így nyert NG-benziloxikarbonil-L-arginin-laktám-klórhidrátot feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, és —10 °C-ra történő hűtés után 6,2 ml (44 mól) trietilamint adunk hozzá. A keletkező szuszpenziót az alábbi vegyes anhidridhez adjuk. 8 g (20 mmól) benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolint [Nikolaides és munkatársai: J. Med. Chem., 11, 74 (1968)] feloldunk 25 ml dimetilformamidban, lehűtjük —15 °C-ra és ezen a hőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 2,22 ml (20 mmól) N-metil-morfolint és 2,64 ml (20 mmól) klórszénsav-izobutil-észtert, majd 10 perc keverés után a fenti dimetilformamidos szuszpenziót. A reakcióelegyet szükség szerint 8—9-es pH-ra állítjuk trietilaminnal, és a keverést 1 órán át —15 °C-on és 1 órán át 0 °C-on folytatjuk. Ezt követően a reakcióelegyet 50 ml benzollal hígítjuk, a kivált sókat kiszűijük és kétszer 20 ml benzollal mossuk. A szűrlethez 50 ml vizet adunk, a fázisokat elválasztjuk, és a vizes fázist háromszor 20 ml benzollal kirázzuk. Az egyesített benzolos oldatokat rendre háromszor 30 ml 10%-os nátrium-karbonáttal, 30 ml vízzel, kétszer 30 ml 0,1 n sósavval és végül kétszer 30 ml vízzel mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után a benzolos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a maradékot 30 ml dietiléterrel elkeverjük, a dietiléter dekantálása után 40 ml petroléterrel eldörzsöljük, szűrjük, és petroléterrel mossuk, majd levegőn szárítjuk. 11,7 g (87%) cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,72-0,78. 3. lépés: benziloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolil--N°-benziloxikarbonil-L-arginin-aldehid 10,05 g ( 15 mmól) védett tripeptid-laktámot (1. példa, 2. lépés) feloldunk 45 ml tetrahidro-furánban, és —20 °C-on erős keverés mellett hozzáadunk 11,25 mmól lítium-alumínium-hidridet tartalmazó tetrahidro-furános h'tium-alumínium-hidrid-oldatot (kb. 0,4 mólos oldatból kb. 28 ml). A redukció eredményességét rétegkromatográfiával ellenőrizzük (a laktám, illetve az aldehid Rf értéke 0,72—0,78, illetve 0,32—0,40), és szükség szerint további hidrid-oldatot adagolunk. A reakció végén a tetrahidrofurános oldatot 1 n sósavval óvatosan 2-es pH-ra savanyítjuk, majd vízzel hígítjuk úgy, hogy az anyag ne váljon ki (kb, 100 ml). Ezután kétszer 30 ml n-hexánnal kirázzuk. A vizes tetrahidrofurános oldatot háromszor 75 ml metilén-kloriddal kirázzuk, majd az egyesített metilén-kloridos oldatokat háromszor 10 ml 10%-os nátrium-karbonát-oldattal, és kétszer 10 ml vízzel mossuk. Ezt követően a metilén-kloridos oldatot nátrium-szulfáton szárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot 50 ml benzolban feloldjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A benzolos oldást és bepárlást megismételjük. Az így kapott párlási maradékot 30 ml dietiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, dietiléterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 7,3 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. Rí 0,32-0,40, op.: 116-117 °C. 4. lépés: D-fenilalanil-L-prolil-NG-karboxi-L-arginin-aldehid 6,7 g (10 mmól) védett tripeptid-aldehidet (1. példa, 3. lépés) feloldunk 100 ml 75%-os vizes etanolban, és 1 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció előrehaladását vékonyrétegkromatográfiával követjük (a védett tripeptid-aldehid és a szabad NG -karboxi-származék Rf értéke 0,90-0,95, illetve 0,35-0,40). A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, 30 ml vízzel mossuk, majd a szűrletet csökkentett nyomáson kb. 30—40 ml-re töményítjük (az etanolt kidesztilláljuk). A maradékot 100 ml vízzel hígítjuk, a vizes oldatot 30 ml metilén-kloriddal kirázzuk, majd lefagyasztjuk és liofílizáljuk. Ily módon 4,3 g cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,35 -0,40. [a]f>° = —123 ± 1° (c = 1, vízben). Aminosav analízis: Phe=l,02, Arg—H = 0,97 (NH3-ként mérve), Pro =1,00 (vonatkozási alap). Mólsúly az aminosav analízis alapján = 471. Kénsavval felszabadítható CO2%=10,9, báriumkarbonátként leválasztható C02% = 2,1. 2. példa D-Fenilalanil-L-prolil-NG-karboxi-L-arginin-aldehid-hemiklórhidrát előállítása 0,48 g NG-karboxi-D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehidet feloldunk 5 ml vízben, és 3—5° közötti hőmérsékleten hozzáadunk 5 ml 0,1 n sósavat. Az oldatot megfagyasztjuk és liofílizáljuk. 0,45 g cím szerinti terméket kapunk. Rf 0,35-0,40. [aß0 = -120° (c = 1, vízben). 3. példa Terc-butiloxikarbonil-D-fenilalanil-L-prolil-N - -karboxi-L-arginin-aldehid előállítása (I képletben X jelentése terc-butiloxikarbonil-csoport és Y jelentése D-fenilalanin-csoport és Pro jelentése L-prolin-csoport) 1. lépés: terc-butilox5karbonil-D-fenilalanil-L-prolil-NG-bet:zi,3xikarbonil-L-arginin-laktám 8,6 g (22 mmól) terc-butiloxikarbonil-NG-benziloxi-karbonil-L-arginin-laktámból kiindulva az 1. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
