176983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás specifikus chromogén új tetrapeptid-származék enzim-szubsztrátumok előállítására

176.983

16

13. példa

Ac-Ile-Glu/piperidino/-Gly-Arg-pNA.HCl (molekulasúly 843»4) előállítása

1,69 g (2 mmól) H-Ile-Glu/OBzl/-Gly-Arg(l\i02)pNA.TFA-t feloldunk 4 ml DMF-ban és az oldatot -10°C-nál alacsonyabb hőmérsékleten tnetil-aminnal semlegesítjük addig, mig az oldat fölé tartott pH-papir lúgos elszineződést mutat. A felszabadit ott aminhoz 435 g (2,2 mmél) AcOpíTP-t adunk. 24 éra múlva az oldatot bepároljuk és a kapott olajat metil-alkohol és viz elegyéből kristályosítjuk. A kapott Ac-Ile-Glu/03zl/“Gly-ArgÍMOgíphA TLC tanúsága szerint tiszta. A kitermelés 1,40 g (89 %),

A leirt módon kapott közti- termék 1,0 g-ját (1,27 mm ól) 30 ml hidr-ogén-f luoriddal reagáltatjuk 0°C~on 1 óra hosszat, majd bepároljuk, A kapott védett terméket feloldjuk 10 %-os vizes ecetsavoldatban és Sephadex G15 oszlopon (gyártja a Pharmacia Pine Chemicals) kromatográfiásan tisztítjuk 10 %-os vizes ecetsavoldattal eluálva.

A tiszta védett terméket tartalmazó frakciót liofilizáljuk, majd ioncserélő kromatográfiának vetjük alá klorid-formában levő QAE-25 gyantával töltött oszlopon, oldószer-" ként és eluálószerként egyaránt 90 % etil-alkohol és 10 % viz elegyét alkalmazva. A kapott tiszta Ac-Ile-Glu-Gly-Arg-pITA.HCl-t liofilizáljuk; a kitermelés 660 mg (75 %)l ennek 227 mg-ját (0,33 ramól) a 7. példában leirt módon kezeljük. Kitermelés : 117 mg (42 %). TLC tanúsba szerint homogén; %=0,47. [*]jp = -31° (c=0,5, Me OH).