176983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás specifikus chromogén új tetrapeptid-származék enzim-szubsztrátumok előállítására

176.983-14-12.példa

Bz -11 e -As p /-m o r±' o lin o /-ü ly -Ar g -pNA . HC1 / molekulasúly; 818,3/ előállítása.

A cim szerinti vegyiilet a 11* példában ismertetett módon állítható elő azzal a különbséggel, hogy izopropil-amin helyett morfolint használunk.

Hozam; 95 mg /35 %/.

TLC tanúsága szerint homogén, = 0*4ő.

£oc3^5 « -24,2° /c a 0,5, MeOH/.

/ym*^/meghatározása

/Km/ éa /Vmax/értéke a Lineweaver-Burk egyenlet szerint számolható ki:

1_ s Km o Vmax

1 4. 1

^ Vmax

Enzimet és szubsztrátumot egy puffer-oldatban elegyítünk, majd spektrofotometriásán mérjük a hidrolízis sebességét. A szubsztrátum koncentrációját /SQ/ változtatjuk, mig az enzim koncentrációját állandó értéken

tartjuk. A reciprok sebességet /g / függvényében ábráo

zóljuk, és a kapott Lineweaver-Burk diagrammból és

/Vmax/ értékét meghatározzuk.

A vizsgálathoz az alábbi reagenseket használjuk:

Puffery 0,05 mól/literes trisz-/hidroximetil/-aminometán /szokásos rövidítéssel: THIS/, pH-ja 8,3»

Ionerössége; 0,25 /HaCl/;

Enzim: Diagen /6,4 Denson-egység/ diagnosztikai reagensből 1 ampulla 2 ml vízben oldva

/Xo íogport tartalmaz»gyártja a Diagnosztic Reagents Ltd oxon,Anglia/