176983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás specifikus chromogén új tetrapeptid-származék enzim-szubsztrátumok előállítására

- 11

176.983

Hozam: 60 mg /58 56/.

TLC "tanúsága szerint homogén, R. = 0,50«

20 A

= -35,0° /c = 0,5, viz és HOAc 1 : 1 arányú

elegye/.

6. példa

Bz“U-0-Glu£ NH-CH/CH^/2j—Gly-Arg—pïiA . HC1 /molekulaeuly: 775,3/ előállítása

1 ml vízmentes desztillált DMP-ban feloldunk 240 mg /0,33 millimól/ S-2222-t és 45 mg /0,39 millióról/ HOSu-t, majd a kapott oldatot -5 °C-ra hütjük és 120 mg /0,58 millimól/ DCCI-t adunk hozzá. A reakcióelegy hőmérsékletét ezután szobahőmérsékletre emelkedni hagyjuk, majd 4 óra elteltével ismét 0 °C-ra hütjük, a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és mossuk. A szülét és a mosófolyadék egyesítése után kapott, közel 2 ml-nyi DMF-cs oldatot 0 °C-ra lehűtjük, majd 0,1 ml tiszta izopropil-amint adunk hozzá. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten közel 50 órán át állni hagyjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot először 5 ml vízzel összekeverjük, majd ismét bepároljuk. A kapott terméket ezután közel 4 ml 50 56— os vizes HOAc—oldatban feloldjuk, majd az oldatot Sephadex G15 gyantát 35 56-os vizes HOAc-oldatban tartalmazó oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk. Eluálószerként ugyancsak 50 %-os vizes HOAc—oldatot használunk. A tiszta terméket tartalmazó

frakciót bepároljuk, majd QAE 25 gyantát /klorid-formáju/

tartalmazó oszlopon ioncserének vetjük alá és 95% Me OH és 5% vi elegyevel eluáljuk.Az eluátumot bepároljuk, vízben oldjuk és végül liofilizáljuk,