176828. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrogént tartalmazó tumorgátló poliszacharidok előállítására
9 176828 10 hűtjük, semlegesítjük 2 n sósav-oldattal, szívatással szűrjük és 500 ml vízzel mossuk, majd elkülönítjük a 2,5 liter extraktumot és a maradékot. Hasonló cxtrakciós lépést végzünk 2 liter 1 n nátriumhidroxid-oldattal 80+2 °C-on 1 órán át és így 2,5 liter extraktumot kapunk. Valamennyi eddig kapott extraktumot egyesítjük és vákuumban koncentráljuk, dialízisnek vetjük alá, ismét koncentráljuk, végül liofilizáljuk az 1. példában megadott módon. 43,5 g máj-barna, 7,5% nedvesség-tartalmú port kapunk, ami 22% kitermelésnek felel meg. A por analízise alapján a következő eredményt kaptuk: C=42,3%, H = 6,5%, N = 3,2%, 0=49,0%. Az 1. példában ismertetett vizsgálatokkal azt is megállapítottuk, hogy a termék egy nitrogén-tartalmú poliszacharid, melynek molekulasúlya 10 000—300 000 és átlagos molekulasúlya 110 000. A kapott anyag Sarcoma—180 tömör daganattal szemben mutatott gátló hatása egereken intraperitoneális adagolás esetén 96% és orális adagolásnál 75% volt. A kitermelés összehasonlítása céljából hasonló extrakciós eljárást végeztünk úgy, hogy csupán vizet használtunk extraháló oldószerként. Az így kapott kitermelés csupán 7,6% volt. 5. példa A következő, 5. táblázatban felsorolt Coriolus nemzetségbeli gombafajok szárított tenyészeteinek 200—200 g-nyi mennyiségét 3 liter vízzel együtt keverővei ellátott lombikba töltjük. Az első extrakciós lépést 95+2 °C-os hőmérsékleten, keverés mellett 3 órán át végezzük. Ezután az elegyet lehűtjük szobahőmérsékletre, a szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük és friss vízzel azonos körülmények között ismételten extraháljuk. Elkülönítés és mosás után a maradékot további 4 alkalommal 2—2 liter 0,1 n, 0,2n, 0,3 n illetve 0,4 n vizes nátrium-hidroxid oldattal extraháljuk a fentiekkel megegyező körülmények között, azzal az eltéréssel, hogy a maradékot szűrés után minden alkalommal 2 n vizes sósav-oldattal semlegesítjük. A vizes extraktumokat, a semlegesített nátriumhidroxidos extraktumokat és a mosófolyadékokat egyesítjük, majd csökkentett nyomáson 700 ml térfogatra koncentráljuk. A kapott koncentrátumot 5 °C hőmérsékleten 72 órán át dializáljuk. A dializátumot tovább töményítjük, majd fagyasztva szárítjuk. Minden esetben porszerű, barna terméket kapunk. A kapott termékek tulajdonságait, melyeket az 1. példában ismertetett módon határoztunk meg, az 5. táblázatban foglaljuk össze. 5 10 15 20 25 5.táblázat Gombafaj Deponálási szám Kitermelés % Analízis eredmények Tumorgátló hatás % c 1 H N Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2412 31,2 40,3 6,2 2,9 91 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2413 31,0 40,4 ! 6,1 2,9 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2415 29,2 40,9 1 6,0 3,0 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2416 30,0 40,2 1 6,2 2,8 91 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2417 28,5 40,6 6,0 2,9 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2418 29,0 40,4 6,1 2,8 92 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2419 30,0 40,4 6,2 2,9 92 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2420 30,6 40,6 6,1 2,8 91 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2421 28,6 40,8 6,2 ' 2,9 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2422 29,2 40,2 6,1 2,9 92 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2423 29,7 40,7 ! 6,0 3,0 91 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2424 30,0 40,5 i 6,2 2,8 90 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2425 29,4 40,3 6,1 í 3,0 92 Coriolus versicolor (Fr.) Quél. 2426 29,8 40,5 6,2 3,3 92 Coriolus hirsutus (Fr.) Quél. 2711 29,0 40,2 6,0 1 5,0 91 Coriolus pargamenus (Fr.) Pat. 2712 27,0 39,5 5,9 1 4,3 83 Coriolus consors (Berg.) Imaz. 988 30,5 39,8 1 5,9 i 4,4 69 A tumorgátló hatást transzplantált Sarcoma—180 tumoron, egereken határoztuk meg. Megjegyzés: A termékek átlagos molekulasúlya 100 000 volt. 6. példa Összehasonlító kísérlet A találmány szerinti eljárást a 2 193 031. számú francia szabadalmi leírás szerinti eljárással hasonlítottuk össze. Mindkét esetben a Coriolus versicolor (Fr.) Quel gombafaj FERM—P—2412 számú letétbe helyezett törzséből nyert szárított micéliumokat használtuk. 55 A 2 193 031. számú francia szabadalmi leírás szerinti eljárás 60 A tenyésztett törzs szárított micéliumának 10 g-nyi mennyiségét 500 ml 4 mólos vizes karbamid-oldattal homogenizáltuk, majd a homogenizátumot 24 órán át 80 °C-on kevertük. Ezután szűrtük az elegyet, majd a 65 szűrletet 60 ml térfogatra koncentráltuk és dializáltuk. 5
