176827. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló, nitrogéntartalmú poliszacharidok előállítására coriolus nemzetségbeli gombák vizes extrakciójával
7 176827 8 A tumorgátló hatást a kezelt egereken észlelt átlagos tumorsúly és a kontroli-állatokon észlelt átlagos tumorsúly hányadosával fejeztük ki. A kísérletek eredményeit a 2. táblázatban ismertetjük, az extrakció körülményeivel, eredményeivel és a termék analitikai adataival együtt. A 2. táblázat adataiból megállapítható, hogy a találmány szerinti extrakciós módszerrel kivont hatóanyag a szubkután úton átültetett Sarcoma—180 tumorsejtekkel szemben legalább ugyanolyan mértékű, sőt egyes esetekben erősebb tumorgátló hatást fejt ki, mint a hagyo- 5 mányos extrakciós módszerrel elkülönített nitrogéntartalmú poliszacharid. A 2. táblázat adataiból egyértelműen kitűnik az is, hogy a találmány szerinti módszerrel igen nagy mértékben fokozható az extrakció hozama. 2.táblázat Minta száma i Vízmennyi' ség kg/kg 1 kiindulási gomba Hőmérséklet C° Nyomás kg/cm* Idő (perc) Extrahált rész, %* Szelektivitás, %** Gombára vonatkoztatott hozam, %*** Sarcoma- 180 gátlása, N-tartalom, % í. ' 12,5 120 2,0 360 34,5 52,2 18,1 89,9 0,71 2. 1 12,5 150 5,0 60 51,5 52,5 27,1 87,9 0,72 3. 12,5 160 6,3 60 62,0 68,4 42,4 91,0 0,72 4. 12,5 165 7,2 30 68,8 59,0 40,6 93,0 0,73 5. 12,5 180 10,2 20 80,6 70,6 57,0 94,9 0,73 Összehasonlító * * * * , 12,5 98 360 21,6 47,9 10,4 89,8 0,71 Megjegyzések : * A felhasznált kiindulási anyag kioldódott része, súly%. ** Az extraktumból elkülönített, 10 000-nél nagyobb molekulasúlyú nitrogéntartalmú poliszacharidok / o-os részaránya. *** 10 000-nél nagyobb molekulasúlyú nitrogéntartalmú poliszacharidoknak a kiindulási gomba-anyagra vonatkoztatott mennyisége, súly%. **** Ugyanazzal a kiindulási anyaggal, azonban ismert extrakciós módszerrel (98 C°-on, atmoszferikus nyomáson végzett extrakció) végrehajtott kísérlet. 2. példa Az 1. példában közölttel azonos törzs micéliumtömegét nyolc részletre osztjuk. Minden egyes micéliumtömeg-részlethez 12,5-szörös súlyú, a 3. táblázatban feltüntetett, lúgos vagy közel semleges vizes oldatot adunk, majd a keveréket a 3. táblázatban feltüntetett hőmérséklet- és nyomás-értékeken extraháljuk. Az extrakció lezajlása után az autoklávban levő anyagot semlegesítjük, majd szűrjük. A szűrletet az 1. példában ismertetett módon dializáljuk. A dializálás után kapott oldat már csak 10 000-nél nagyobb molekulasúlyú anyagokat tartalmaz. A kapott anyagokat az 1. táblázatban felsorolt reagens-rendszerekkel vizsgáljuk. A vizsgálatok eredményei azt igazolják, hogy minden esetben nitrogéntartalmú poliszacharidokat kapunk. A kapott hatóanyagok tumorgátló hatását egereken vizsgáltuk, szubkután úton átültetett Sarcoma—180 tumorsejtekkel szemben. Az eredményeket a 3. táblázatban közöljük. A 3. táblázat adataiból megállapítható, hogy a találmány szerinti extrakciós műveletekkel elkülönített hatóanyagok tumorgátló hatása legalább azonos vagy erősebb az ismert, atmoszferikus nyomáson végzett forróvizes extrakcióval elkülönített hatóanyagénál. 35 40 3. táblázat 1 I Gombára Sarcoma-Nitrogén-Minta Vizes oldat Hőmér-Nyomás Idő száma séklet, °C kg/cm* (perc) rész, % vitás, % ! tatott ho; zam, % 180 gátlása, % tartalom, % í. 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát 120 2,0 60 40,0 58,0 : 21,2 92 4,92 2. 2 n nátrium-hidrogén-karbonát 160 6,3 60 74,4 36,6 27,0 90 4,12 3. 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát 160 6,3 60 50,7 46,8 24,6 92 3,65 4. 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát 180 10,2 20 57,4 51,9 29,8 92 2,12 5. 0,1 n nátrium-hidrogén-karbonát 200 15,5 20 84,3 50,3 42,4 98 1,25 6. 0,1 n nátrium-hidroxid 180 10,2 60 72,6 50,0 38,1 91 2,39 7. 14% ammónium-hidroxid 180 18,0 180 68,9 30,5 21,0 94 5,29 8. 1% L-glutamin 200 15,5 10 85,1 55,1 46,9 92 3,42 Összehason- I lító 1 0,1 n nátrium-hidroxid I 98 60 22,3 38,1 8,5 90 4,91 (A megjegyzéseket illetőleg lásd a 2. táblázatot)
