176802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmus-sejtmasszák lipid- és nukleinsavtartalmánal csökkentésére
7 176802 8 teljesen a kapott maradékot, hanem az alaposan leszívatott szűrőlepényt, amelynek szárazanyag-tartalma 85%, 900 ml vízben szuszpendáljuk. A kapott szuszpenzió 8,9 pH-értéket mutat, a nedves biomasszában visszamaradt ammónia hatására. A szuszpenziót keverés közben 65 °C hőmérsékletre melegítjük és 5 perc múlva a pH-értéket sósav hozzáadása útján 7,2-re állítjuk be. Ezután még 15 percig keverjük a szuszpenziót 65 °C hőmérsékleten, majd lehűtjük 40 °C-ra és centrifugáljuk. A kapott üledéket megszárítjuk. 8. példa A Candida lipolytica ATCC 20 383 élesztőtörzset, amely szénhidrogének tápanyagként való értékesítésére képes, n-paraffinokat tartalmazó vizes tápközegben, oxigéntartalmú gáz jelenlétében tenyésztjük. Az így kapott élesztő-sejtmasszát elkülönítjük a tápoldattól és megszárítjuk. 100 g szárított élesztő-sejtmasszát szobahőmérsékleten, közönséges nyomáson 300 g metanolban szuszpendálunk és ebbe a szuszpenzióba 15 perc alatt 10 g ammó- 25 nia-gázt vezetünk be. Ez alatt a szuszpenzió hőmérsékletét hűtéssel 15 °C-on tartjuk. A gázbevezetés befejezése után az elegyet 22 °C hőmérsékleten még 20 percig keverjük, majd zsugorított szívószűrőn keresztül leszűrjük. A szűrőn maradt lepényt újból szuszpendáljuk 300 ml 30 metanolban és újból leszívatjuk. A két szűrletet egyesítjük. Sárga színű oldatot kapunk, amely a kiindulási sejtmasszában jelen volt lipideket tartalmazza. A metanolt és az ammóniát csökkentett (14 Torr) nyomáson eltávolítjuk. A második szűrés után visszamaradt maradékot, amely a szétroncsolt és zsírtalanított mikroorganizmus-sejtekből áll, vákuum-szárítószekrényben, 100 Torr nyomáson, 40 °C hőmérsékleten 5 óra hosszat szárítjuk. Az így kapott termék színe világosabb, mint a kiindulási anyagként alkalmazott szárított élesztő-sejtmasszáé volt; a kapott termék szagtalan. A fenti módon kapott, eredetileg a kiindulási anyag súlyára számítva 7,5 súly% nukleinsavtartalmának csökkentése céljából 100 g fenti módon zsírtalanított és szárított élesztő-sejtmasszát 100 ml desztillált víz és 5 100 ml metanol elegyében szuszpendálunk. A szuszpenziót, amelynek pH-értéke 6,8-ra áll be, keverés közben 15 percig melegítjük 50 °C hőmérsékleten, majd centrifugáljuk és az élesztő-fehérjét tartalmazó üledéket elkülönítjük az oldott nukleinsavakat tartalmazó folyadék- 10 fázistól. Ezt az üledéket szobahőmérsékleten még egyszer mossuk, majd fagyasztószárítással megszárítjuk. A kapott szárított termék nukleinsavtartalma az eredeti 7,5 súly%-ról 0,4 súly%-ra csökkent. 9. példa Pénicillium chrysogenum ATCC 10 238 törzset egy tejcukrot, folyékony kukoricalekvárt, foszfátot, karbo- 20 nátot és magnézium-szulfátot tartalmazó tápoldatban a szokásos módszerekkel, aerob körülmények között tenyésztünk. A termelt penicillin elkülönítése után a visszamaradt micéliumot megszárítjuk és ezt alkalmazzuk kiindulási anyagként. Az eljárást a 8. példában leírt módon folytatjuk le, csupán azzal az eltéréssel, hogy ammónia-gáz helyett koncentrált (33%-os) ammónium-hidroxid-oldatot alkalmazunk. A zsírtalanított száraz micéliumot vízzel 30 °C hőmérsékleten mossuk. 11. példa Kiindulási anyagként ugyanolyan sejtmasszát alkal- 35 mázunk, mint a 10. példában. Az eljárást is a 10. példában leírt módon folytatjuk le, de azzal az eltéréssel, hogy oldószerként metanol helyett etanolt alkalmazunk. A vízzel történő extrakció folyamán a hőmérsékletet 85 °C-ra emeljük, és azelegyet 15 percig a hőmérsékleten 40 tartjuk. A fenti példákban részletesen leírt kísérletek eredményeit az alábbi táblázatok tartalmazzák. I/a táblázat A lipidek eltávolítása Példa sorszáma 100 g kUin sejtmai fajta dulási isza zsír súly% nukleinsav súly% Oldószer NH3 (g) M. 33%-os NH4OH (ml) í. Metilomonas i 11,2 metanol nh3 10 2. 7 11,2 metanol nh4oh 30 3. 7 11,2 metanol NH4OH 60 4. 7 11,2 etanol NH4OH 30 5. 7 11,2 glikolmonometiléter NH4OH 60 6. 7 11,2 izopropanol NH4OH 30 7. 9,6 15,4 metanol nh3 15 8. Candidalipolytica 8,2 7,5 metanol nh3 10 9. 8,2 7,5 etanol nh4oh 60 10. száraz micél ium 3,5 2,6 metanol nh4oh 30 11. 3,5 2,6 etanol nh4oh 30 4
