176755. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szérumok fotometriás meghatározását akadályozó zavarosság megszüntetésére
5 176755 6 2 órán át 90 °C-on melegítünk. Az elegyet további 6 óráig ezen a hőmérsékleten tartjuk. Lehűlés után 0,2 mól laurinsavat és 2 g p-toluolszulfonsavat adunk hozzá, majd 2 óráig 100 °C-on melegítjük és még 2 óráig ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ezután hidrolízis céljából azonos térfogatú vizet adunk hozzá és 1 óráig keverjük. Végül az oldatot konyhasóval telítjük és háromszor etil-acetáttal kirázzuk. Az egyesitett észterfázisokat nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd mintegy 100 ml térfogatra bepároijuk. Utána az oldatot 50 g bázikus alumínium-oxiddal rázzuk. Rétegkromatográfiás próbát végzünk a szabad zsírsav jelenlétének megállapítása céljából. Ha még zsírsavnyomok mutathatók ki, az alumínium-oxid-kezelést megismételjük. Végül az alumíniam-oxidot leszűrjük és az oldószert lepároljuk, utoljára olajszivattyú-vákuumban. A kitermelés 60—90%-a polietilénglikol lánchosszától függően. A3,4, illetve 5 etilén-oxid-egységet tartalmazó polietilénglikol fentiek szerint előállított laurinsav-észterének 15 súlyrészét 6, illetve 7 etilén-oxid-egységet tartalmazó 20 súlyrész észterrel és 8 etilén-oxid-egységet tartalmazó, körülbelül 5% észterrel elkeverve állítjuk elő a találmány szerinti szert. 2. példa 4% Trietilénglikol-észtert, 10%tetraetilénglikol-észtert, mintegy 15% pentaetilénglikol-észtert és 60% hexa-, hepta- és oktaetilénglikol-észtert tartalmazó, kereskedelmi forgalomban levő polietilénoxid-laurinsav-észter keveréket a vizes oldatból triklór-etilénnel extraháljuk, majd megszárítjuk. A kapott termékhez 8% 1. példa szerint előállított trietilénglikol-észtert adunk. 3. példa Húgysavmeghatározás 0,1 ml erősen zavaros szérummintához 1 ml következő összetételű reagenskeveréket adunk: 45 millimól K4P207, pH 8,5; NAD+; kataláz; aldehid-dehidrogenáz; 5 térfogatszázalék etanol; 3 térfogatszázalék 2. példa szerinti szer. Szobahőmérsékleten való 5 perc állás után a próba feltisztul. A szérum-hozzáadás után az extinkció a találmány szerinti szer hozzáadása nélkül AE334nm=2,239. A szer hozzáadása után az extinkció AE334nm=0,777. Reagens-vakérték: AE=0,570. A húgysavmeghatározást a feltisztult próbában urikáz hozzáadása és az extinkcióváltozás (AE) mérése útján végezzük el 334 nm-nél (lásd a mellékelt rajz 1. ábráját). 4. példa Vércukormeghatározás fehérjementesítés nélkül 0,02 ml erősen zavaros szérummintát 2 ml következő összetételű reagenskeverékkel elegyítünk: 0,2 mól foszfátpuffer (pH 8,0); fenol; p-amino-fenozon; peroxidáz (POD); glükóz-oxidáz (GOD); 0,4 térfogatszázalék polietilén-dodecil-éter 8 etilén-oxid-egységgel ; 0,4 térfogatszázalék 2. példa szerinti szer. A próba feltisztulása és a színkialakulás egyidőben következik be. Az extincióváltozást a mellékelt rajz 2. ábrája mutatja. 5. példa Glutamát-oxálacetát-transzamináz (GOT) meghatározása 0,5 ml zavaros szérumpróbát 3,1 ml következő összetételű reagensoldattal elegyítünk: Foszfátpuffer (pH 7,4); aszpartát; NADH; laktát-dehidrogenáz (LDH); malát-dehidrogenáz (MDH); 2,85 térfogatszázalék 2. példa szerinti szer. A szérum kezdeti extinkciója 1,870. 30 perc állás után a próba feltisztul. Az extinkció 0,820. Indításkor alfa-keto-glutarátot adunk a próbához és az extinkciót meghatározzuk 366 nm-nél. A mérési eredményeket a mellékelt rajz 3. ábrája mutatja. ' Különösen jó eredmények érhetők el, ha a 3—5. példákban leírtak szerint járunk el, de a 2. példában ismertetett szer helyett olyat használunk, amely 60% polietilénglikol-300-laurátból (átlagos molekulasúly: 300) és 40% polietilénglikol-200-laurátból (átlagos molekulasúly: 200) áll, melyeket az 1. példa szerint szokványos polietilénglikol 300-ból, illetve 200-ból állítunk elő. E szer összetétele gázkromatográfiás elemzés szerint a következő: monoglikol-laurát 1,2% diglikol-laurát 3,1% trigikol-laurát 13,1% tetraglikol-laurát 17,9% pentaglikol-laurát 16,2% hexaglikol-laurát 15,1% heptaglikol-laurát 12,4% oktoglikol-laurát 8,6% nonaglikol-laurát 4,9% dekaglikol-laurát 2,6% undekaglikol-laurát 1,1% dodekaglikol-laurát 0,4% A szabad poliglikollal való szennyeződés kevesebb 2%-nál. 6. példa Erősen zavaros próba feltisztulása polietilénoxid-undekánsavészter detergens segítségével 0,1 ml erősen zavaros szérumpróbát a következő összetételű, 1 ml reagens-oldattal keverünk: 45 millimól K4P207; pH=8,5; NAD+; kataláz; aldehid-dehidrogenáz; 5 térfogatszázalék etanol. A szérum hozzáadása után az extinkció: AE334nm= =2,305. 1,8 térfogatszázalék polietilénoxid-dundekánsavészter (az etilénoxid-egységek átlagértéke 6) és 0,2 térfogatszázalék trietilénoxid-undekánsavészter hozzáadása után a próba 15 perc alatt kitisztul, AE334nm=0,790. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
