176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
3 176623 4 vegyületet savaddíciós sójává vagy komplexévé alakítjuk. A kiindulási vegyületek vagy közbenső termékek előállításához használt védőcsoportok a peptidszintézisben szokásos védőcsoportok és hidrolízissel, savas kezeléssel, redukcióval, aminolízissel vagy hidrazinolízissel könynyen eltávolíthatóaknak kell lenniük. Az aminocsoportot rendszerint acilcsoporttal, például formil-, trifluoracetil-, ftaloil-, benzolszulfonil-, p-toluolszulfonil-, o-nitrofenilszulfenil- vagy 2,4-dinitrofenil-szulfenilcsoporttal vagy araik ilcsoporttal, például benzil-, difenilmetil- vagy trifenilmetil-csoporttal (ezek a csoportok adott esetben kevés szénatomos alkoxicsoporttal, például o-metoxi- vagy p-metoxi-csoporttal lehetnek szubsztituálva) vagy egy benziloxikarbonil-csoporttal, például benziloxikarbonil-, o-brómbenziloxikarbonil-, p-brómbenziloxikarbonil-, o-klórbenziloxikarbonil-, p-nitrobenziloxikarbonil-, p-metoxibenziloxikarbonil-, p-fenilazo-benziloxikarbonil- vagy p-(p'-metoxifenilazo)-benziloxikarbonil-csoporttal, alifás oxikarbonil-csoporttal, például ciklopentiloxikarbonil-, triklóretiloxikarbonil-, terc-amiloxikarbonil-, terc-butoxikarbonil- vagy diizopropil-metoxi-karbonil-csoporttal vagy aralkíloxikarbonil-csoporttal, például 2-fenilizopropoxikarbonil-, 2-tozil-izopropoxikarbonil- vagy 2-p-difenil-izopropoxikarbonil-csoporttal védhetjük. Az aminocsoportok úgy is megvédhetők, hogy 1,3-diketonnal, például benzoilacetonnal, acetilacetoxmal vagy dimedonnal reagáltatva enamint képezünk. A karboxilcsoportot amidképzéssel, hidrazidképzéssel vagy észterezéssel védhetjük. Az amidcsoport 3,4-dimetoxibenzil- vagy bisz(p-metoxifenil)-metilcsoporttal lehet szubsztituálva. A hidrazidcsoport benziloxikarbonil-, triklóretiloxikarbonil-, trifluoracetil-, terc-butoxikarbonil-, tritil- vagy 2-p-difenil-izopropoxikarbonilcsoporttal lehet helyettesítve. Az észtercsoport alkanollal, például metanollal, etanollal, például benzilalkohollal, p-brómbenzilalkohollal, p-klórbenzilalkohollal, p-metoxi-benzilalkohollal, p-nitrohidrilalkohollal, benzoilmetilalkohollal, p-brómbenzoil-metilalkohollal vagy p-klórbenzoil-metilalkohollal, fenollal, például 2,4,6- -triklórfenollal, pentaklórfenollal, p-nitrofenollal, 2,4- -dinitrofenollal, p-cianofenollal vagy p-metánszulfonilfenollal vagy egy tiofenollal, például tiofenollal, tiokrezollal vagy p-nitrotiofenollal lehet szubsztituálva. A szerinben, treoninban és tirozinban a hidroxilcsoport kívánt esetben észterezéssel vagy éterezéssel védhető. Észterező csoport például a kevés szénatomos alkanoilcsoport, amilyen az acetilcsoport vagy aroilcsoport, amilyen a benzoilcsoport vagy karbonilcsoport, például benziloxikarbonil- vagy etiloxikarbonil-csoport lehet. Éterezéssel védett csoport például benzil-, tetrahidropiranil- vagy terc-butilcsoport lehet. A hidroxilcsoport védelmét a 2,2,2-trifluor-l-terc-butil-oxikarbonil-aminoetil- vagy 2,2,2-trifluor-l-benziloxikarbonil-aminoetil-esoporttal lehet elérni. Ezeket a hidroxilcsoportokat azonban nem mindig szükséges védeni. Az argininben a guanidinocsoport aminocsoportját nitro-, tozil- vagy benziloxikarbonil-csoporttal lehet védeni, azonban a guanidinocsoport védelme nem szükségszerű. A hisztidinben az iminocsoportot benzil-, tritil-, benziloxikarbonil-, tozil-, adamantiloxikarbonil-, 2.2.2- trifluor-l-terc-buíiloxikarbonil-aminoetil- vagy 2,-2.2- trifluor-l-benziloxikarbonil-aminoetil-csoporttal védhetjük, de ezt az iminocsoportot sem kell mindig védeni. A kiindulási vagy közbenső peptideket úgy állíthatjuk elő, hogy aminosavakat vagy kettő-négy aminosavból álló peptideket az I általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzálunk. Például védett a-aminocsoportot és aktivált karboxil-végcsoportot tartalmazó aminosavat szabad a-aminocsoportot és védett karboxil-végcsoportot tartalmazó aminosavval vagy pepiiddel reagáltatunk. Másrészt aktivált a-aminoesoportot és védett karboxil-végcsoportot tartalmazó aminosavat vagy pepiidet szabad karboxil-végcsoportot és védett a-aminocsoportot tartalmazó aminosavval vagy pepiiddel reagáltatunk. A karboxilcsoportot például savaziddal, savanhidriddel, savimidaZőliddál vagy aktív észterrel aktiválhatjuk úgy, hogy cianometilészterré, tiofenilészterré, p-nitrotiofenilészterré, p-metánszqlfonilfenilészterré, tiodilészterré, p-nitrofenilészterré„2,4-dinitrofenilészterré, 2,-4,5-triklórfenilészterré, 2,4,6-triklórfenilészterré, pentaklórfenilészterré, N-hidroxiftálimidoészterré, 8-hidroxipiperidinészterré vagy N-hidroxipiperidinészterré vagy karbodiimiddé, N,N'-karbonil-diimidazollá vagy izoxazoliumsóvá, például Woodward-féle reagenssé alakítjuk. A karboxilcsoportot szokásos módon, például savaziddal, savanhidriddel, aktív észterrel vagy karbodiimiddel aktiválhatjuk. Előnyös kondenzációs reakció a Wünsch-módSzer, az azidos, az aktív észteres vagy Geiger-féle módszer. A kondepzációs reakcióban a racemizálódást gondosan el kell kerülni. (CH^COOR A kapott H-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-NHCHCO-szerkezetű egységet tartalmazó peptid — ebben a képletben Aj és R a fenti jelentésűek — felhasználható a gyűrűképzésre. A gyűrűképzési reakciót aktivált i co-karboxil-csoportot tartalmazó a-amino-szuberinsav és N-terminálisan szabad aminocsoportot tartalmazó L-aminosav kondenzációjával végezzük. A kondenzációs reakció során a szerin és treonin hidroxilcsoportját célszerűen megvédjük. A találmány szerinti előnyös eljárás lényege, hogy az a-amino-szuberinsavat tartalmazó, adott esetben védett aktív csoportokat tartalmazó peptidgyűrűt az adott esetben védett aktív csoportokat tartalmazó peptidlánccal kondenzáljuk. Tehát az 1-től a 6—9. aminosavakat tartalmazó N-terminális fragmenst a 7—10-től a 31. aminosavakat tartalmazó peptidszekvenciával kondenzáljuk. Mindkét fragmens reakcióképességének fokozására és a racemizálódás megakadályozására C-terminális aminosavként glicint használunk. Előnyös, ha az 1—9. aminosav-szekvenciát tartalmazó pepiidet a 10—31. aminosav-szekvenciát tartalmazó pepiiddel reagáltatjuk. Ezt a kondenzációs reakciót a szabad terminális karboxilcsoportot tartalmazó pepiidből kiindulva, az úgynevezett Wünsch-módszerrel vagy analóg módszerekkel végezhetjük. Előnyösen úgy is eljárhatunk, hogy azid vagy hidrazid terminális csoportot tartalmazó peptidből indulunk ki, vagy aktívészteres módszerrel vagy vegyes anhidrides módszerrel dolgozunk. Az N-terminális fragmens szintézisét, tehát az 1—9. aminosavakat tartalmazó nonapeptid előállítását a példákban ismertetjük, de az 1—6. hexapeptid, 1—7. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
