176580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimek és enzimkeverékek rögzítésére kopolimer réteg(ek)ben
7 176580 3. példa Kolinészteráz enzim immobilizálása 25% vinilbutirál—75% vinilalkohol kopolimer membránban. A kopolimer bői és az enzimből az 1. példa szerint oldatokat készítünk. Az oldatok megfelelő térfogatarányban történő elegyítése után 50 cm2 felületű plexi lemezre filmet öntünk. A filmet szobahőmérsékleten, levegőáramban beszárítjuk. A száraz filmet a plexi lemezről leválasztjuk és foszfát puffer oldatban addig mossuk, amíg a pufferban enzimaktivitás mutatható ki. Enzimaktivitásra számított kitermelés: 18%. 4. példa Glükózoxidáz enzim immobilizálása 30% vinilpropionát—70% vinilalkohol összetételű kopolimerben. Glükózoxidáz enzimből (Merck termék) 25 mg/cm3 töménységű oldatot készítünk + 5 °C-on, 7,0 pH-jú, 0,1 m koncentrációjú foszfát puffer oldatban történő oldással. A kopolimerből vízfürdőn 8 s%-os oldatot állítunk elő, majd ennek 10 cm3-éhez 2 cm3 enzimoldatot adunk, és a rendszert gondosan homogenizáljuk. A levegőbuborékok eltávozása után az elegyből 50 cm2 felületű üveglemezre filmet öntünk, s ezt levegőáramban súlyállandóságig szárítjuk. Az üveglapról leválasztott filmmel a továbbiakban az 1. példában leírt módon járunk el. Enzimaktivitásra számított kitermelés: 37%. 5. példa Glükózoxidáz enzim immobilizálása 20% vinilklóracetál—80% vinilalkohol kopolimer membránban. Az oldatok készítésénél a 4. példában leírtak szerint járunk el. A kopolimer oldatából egyenlő méretű üveglapokra filmeket öntünk. Két száraz filmet az enzim kopolimert is tartalmazó oldatával (10 cm3 kopolimer oldat + 2 cm3 enzimoldat) — gondosan ügyelve arra, hogy a filmek között levegőbuborék ne maradjon — összeragasztunk. A száraz, szendvics szerkezetű membránt felhasználás előtt puffer oldatba áztatjuk be. Enzimaktivitásra vonatkoztatott kitermelés: 46%. 6. példa Tejsavdéhidrögengázl enzim rögzítése 40% vi' hilklóracetál—60% vinilalkohol kopolimer membránban. '"A‘tejsavdehidrogterráz enzimből (K&K Fine" ‘ Çhémieals' térrhék) fotóét pufferban -fph =*• 6) ‘ t,f i/cm3 tônièhÿsëgû Oldatot -kétótűnk.: 1 cm2 ' ' eHiáWioídatot'élégyítühk a kopolimerből melegen "iiéèZftètt *10! cm3 Hérfogátú; -4,5 s% pöfiirfep töménységű, 0)15 s% fcárboximetil-éelMóz és 0,001 " s% malondialdehid adalékanyagokat tartalmazó vizes oldattal. Az elegyből 50 cm2 felületű plexilapon filmet öntünk, amit megszáradás után a plexi lemezről leválasztunk. A filmet ezt köve- 5 tőén — gondosan ügyelve arra, hogy mind a két oldala egyenletesen nedvesed jen — a kopolimer és az adalékanyagok közös oldatába merítjük. Néhány perc elteltével abból kiemeljük, az oldat feleslegét lecsurgatjuk és a filmet enyhén kife- 10 szítve hagyjuk megszáradni. Enzimaktivitásra vonatkoztatott kitermelés : 36%. 7. példa 15 Glükózoxidáz—peröxidáz enzim kêvèrêk immobilizálása 1% vinilf orrnál—90% vinilalkohol összetételű kopolimer filmben. Az enzimekből 20 mg/cm3 glükózoxidáz, illetve 20 15 mg/cm3 peröxidáz koncentrációjú közös törzsoldatot készítünk +5 °C-on 6,5 pH-jú 0,1 m töménységű foszfát pufferban való oldással. A kopolimerből vízfürdőn 5 s%-ös oldatot állítunk elő. Ezután 2 cin3 enzim-tartalmú oldatot 10 cm3 25 kopolimer oldattal homogenizálunk, majd az elegyből 50 cm2 felületű üveglapra filmet öntünk. A légszáraz filmet a kopolimer enzimet nem tartalmazó oldatába merítjük, s miután a film mindkét felülete egyenletesen rtedvesedett 30 azt az oldatból kiemeljük. A filmet függőlegesen felfüggesztjük és a kopolimer oldat feleslegét -hagyjuk lecsöpögni. Az ehzimaktivrtásra vonatkoztatott kitermelés glükózoxidázra 44%, per■ óxidázra pedig 57%. 35 8. példa- Alkoholdéhidrogenáz enzim immobilizálása 40 0,25% viniláminopropilétér—99,75% vinilalkohol kopolimer membránban. Az alkoholdéhidrogenáz enzimből (K&K Fine Chemicals termék) foszfát puffer oldatban ■ (pH = 6,5) 0,05 g/cm3, a kopolimerből pedig me- 45 légen történő oldással 4,0 s% töménységű oldatot állítunk elő. A kopolimer oldatából azonos alakú és méretű, egyenként 50—50 cm2 felületű plexi lemezekre filmeket öntünk' és- ezeket levegőáramban beszárítjuk. 1 cm3 erizimoldatöt és 50 5 cm3 polimer oldatot keveréssel homogenizálunk, majd az eleggyel két filmet — ügyelve ar: ra, hogy a filmek között levegőbuborék ne maradjon — összeragasztunk. Az enzimaktivitásra számított kitermelés 46%. 55 A filmeket felhasználás előtt tanácsos néhány percig puffer oldatban előduzzasztani. 9. példa üreáz enzim immobilizálása 1,6% vinil-terc. butiléter—98,4% vinilalkohol kopolimer filmben. 0,2 g uheáz enzimből (Merck- tennék) -néhány csepp víz jelenlétében töméiny =éZúSzpénziót- ké-szítünk, melyhez intenzív keverés közben a-ko-4
