176462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolin-származékok előállítására fermentációs úton
176462 12 4 liter etilacetáttal eluáljuk, és a. további feldolgozást az a) pontban leírtak szerint végezzük. így kapunk 55 g vékony rétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos ergotoxin-benzol-adduktot, amelynek tisztasági foka 96%-os. [a]f)° =-183° (c= 1,8 kloroformban), vagy d) az alkaloida-koncentrátum összalkaloid-menynyiségére számított 5-szőrös mennyiségű semleges I aktivitási fokú alumíniumoxid + aktív-szén adszorbens keverékkel (adszorbensek aránya: alumíniumoxid : aktív-szén = 5:1) elkeverjük egy ke verő-szűrő berendezésben 3 liter etilacetáttal, majd kétszer 2,5 liter etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített extraktumot +30 °C hőmérsékleten szárazra pároljuk, és a további feldolgozást az a) pontban leírtakkal analóg módon végezzük. így kapunk 55 g vékonyrétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos ergotoxin-benzil-adduktot, amelynek a tisztasági foka 96%-os. [“Id* = -183° (c= 1,8, kloroformban). 55,2 g ergotoxin-benzol-adduktot enyhe melegítés közben feloldunk 830 ml abszolút etanolban, majd hozzáadjuk a számított mennyiségű etánszulfonsav 0,5 mólos abszolút etanolos oldatát és 4,2 liter vízmentes étert. A kapott kristályokat leszívatjuk és +70 °C hőmérsékleten szárítjuk. így kapunk 95%-os kitermeléssel vékonyrétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos ergotoxin-etánszulfonátot, amelynek tisztasági foka 98—100%-os. 11 8. példa A megfelelő mennyiségű tenyészfolyadék szűrésével kapott 12,0kg-nyi micéliumot 3 óra leforgása alatt 20 °C hőmérsékleten 18 liter acetonnal extraháljuk, majd a szűrés után kapott vizes-acetonos extraktumot foszforsavval pH = 2-3-ra állítjuk be, és kétszeres extrakcióval zsírmentesítjük és tisztítjuk, nevezetesen 17 liter petroléterrel és 11 liter 1 :1 térfogatarányú petroléter-xilol-eleggyel. A kapott alkaloid-tartalmú alsó (nehezebb) fázist pH = 8—9-nél (pH-beállítás: ammóniumhidroxid-oldattal) kimerítően extraháljuk összesen 7 liter etilacetáttal. A felső fázist azonos térfogatú vízzel mossuk, majd 30 °C hőmérsékleten 0,70 literre töményítjük, hozzáadunk 1,40 liter kloroformot, és az így kapott reakcióelegyet +4°C hőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk. Az iszapszerűen kivált csapadékot leszűrjük. A szűrletet a fentiekben megadott körülmények között 0,180-literre töményítjük, és 2 liter etilacetáttal 1,100 kg I aktivitási fokú alumíniumoxidon kromatografáljuk, a kapott eluátumot vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot feloldjuk 100 ml toluolban (benzolban vagy xilolban). Az oldatot éjszakán át +4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, majd elválasztjuk az elkülönült anyagot és vákuum exszikkátorban szárítjuk. így kapunk 14,0 g fehér, kristályos, ergotoxin-toluol-adduktot, amelynek tisztasági foka 98-100%-os. Az 5. példa szerint kapott tenyészfolyadék 10,0 literét keverés és 10súly% ammóniumszulfát hozzáadása közben pH = 8—9-nél és 20 °C hőmérsékleten 25,0 üter etilacetáttal extraháljuk. Az alsó (nehezebb) biofázist elöntjük, a szerves fázist kétszer 5,0 liter 2%-os foszforsavval extraháljuk, az egyesített vizes fázis pH-ját ammóniumhidroxid-oldattal beállítjuk 8—9-re, és kétszer 5,0 liter etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázist 30 °C-t meg nem haladó hőmérsékleten 200 ml-re bepároljuk, a maradékhoz 400 ml kloroformot adunk és a reakcióelegyet éjszakán át +4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. A kikristályosodott anyagot leszívatjuk és vákuum exszikkátorban szárítjuk. 4,20 g (71,2%) ergometrin-kloroform-adduktot kapunk, amelynek a tisztasági foka 90,7%-os. A fentiekben megadott körülmények között 120 ml-re töményített ergotoxin-tartalmú szűrletet 300 g I aktivitási fokú alumíniumoxidon kromatografáljuk etilacetáttal, az eluátumot vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot feloldjuk 30 ml benzolban és az oldatot éjszakán át +10°C-t meg nem haladó hőmérsékleten hűtjük. A kivált anyagot leszívatjuk és vákuum-exszikkátorban szárítjuk, így kapunk 7,90 g (73,6%) fehér, kristályos ergotoxin-benzol-adduktot, amelynek a tisztasági foka 91,6%-os. 9. példa 10. példa A 7. példa szerint kapott ergotoxin-benzol-adduktot feloldjuk 0,7 liter dioxánban, és az oldatot 60 °C hőmérsékleten 50 atm hidrogéngáz-nyomáson fűthető rázó- vagy keverő-autoklávban Raney-nikkel jelenlétében 2 óra leforgása alatt hidrogénezzük. A kapott 9,10-dihidroergotoxin-oldatról leszűrjük a katalizátort és a tiszta szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk etilacetátban és az oldatot +4 °C-on állni hagyjuk. A kikristályosodott hidrogénezett bázist leszívatjuk és 60 °C-on szárítjuk. 47,5 g (90%) vékonyrétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos dihidroergotoxin-bázist kapunk, amelynek tisztasági foka 90%-os. [a]o° = —45,6° (c = 2, piridinben). A kapott kristályos dihidroergotoxin-bázist hozzáadjuk keverés közben 200 ml metanol és a számított mennyiségű etánszulfonsav 1 mólos metanolos oldatának elegyéhez. Rövid idő múlva kikristályosodik az alkaloidsó, amelyet leszívatunk és szárítunk. 48,5 g (95%) vékonyrétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos dihidroergotoxin-etánszulfonátot kapunk, amelynek tisztasági foka 98-100%-os. 11. példa A 9. példa szerint kapott ergotoxin-benzol-addukt 7,20g-ját 250 ml 90%-os vizes dioxánban 20-25 °C hőmérsékleten, fény kizárása közben, 2,9 g 5%-os palládiumos aktívszén jelenlétében egy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
