176225. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükagon kinyerésére az inzulin-előállítás során alkalmazott lúgos kristályosítás során keletkezett felülúszóból
MAOVÁg SZABADALMI 176225 NÉPKÖZTARSASAG LEÍRÁS Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1975. I. 31. (EI-598) Közzététel napja: 1980. VII. 28. C 07 G 7/00 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Megjelent: 1981. VI. 30. Feltaláló: Szabadalmas: Jackson Richard Lee, tudományos kutató, biokémikus, Indianapolis, Indiana, Eli Lilly and Company, Indianapolis, Amerikai Egyesült Államok Indiana. Amerikái Egyesült Államok Eljárás glukagon kinyerésére az inzulin-előállítás során alkalmazott lúgos kristályosítás során 1 A találmány tárgya új eljárás glukagon kinyerésére az inzulin-előállítás során alkalmazott lúgos kristályosítás során keletkezett felülúszóból. A találmány szerinti glukagon-kinyerési eljárás 5 során 1. a glukagon-tartalmú fehérjét az inzulin előállításnál alkalmazott lúgos kristályosítás során keletkezett felülúszóból 10 a) 4,2—6,6 pH-n legfeljebb 20tf% 1^4 szénatomos alkanol jelenlétében végzett izoelektromos ponton történő kicsapással, vagy b) ioncserélő kromatográfiával, a glukagon-tartal- 15 mú fehérjét adszorbensen megkötve, majd az adszorbenst híg bázissal — előnyösen 0,1 n ammónium-hidroxid-oldattal — eluálva, vagy c) az a) eljárásváltozat szerinti izoelektromos ponton történő kicsapás termékének a kicsapást 20 követő, enyhén lúgos — előnyösen legfeljebb 8,5 pH-értékű — fenolos vizes oldatból történő kisózásával izoláljuk, 2. a kapott szilárd anyag oldatából a glukagont 25 valamely szervetlen só, előnyösen ammónium-szulfát hozzáadásával pH 1,5—2,7 tartományban elválasztjuk a többi fehérjétől, és 3. a 2. lépésben kapott glukagont feloldjuk, és 4,5—8,5 pH-értéken, 2—10 mg/ml gjukagon-kon- 30 keletkezett felülúszóból 2 centráció mellett végzett egy vagy több kristályosítással tisztítjuk. Röviddel azután, hogy 1921-ben Banting és Best az inzulint felfedezte, számos kutató [Muriin és munkatársai, J. Biol. Chem. 56, 252 (1923) és Kimball és Muriin, J. Bioi. Chem. 58,337 (1924)] megfigyelése szerint bizonyos inzulintartalmú hasnyálmirigy-kivonatok beadása után a vércukorszint emelkedik. A hiperglikémiás reakcióért felelős faktort hívták glukagonnak. Jelenleg a glukagon legfontosabb felhasználását az inzulin-okozta hipoglikémia kezelése jelenti. Mivel világszerte nő a cukorbetegek száma, a glukagon iránti kereslet is növekszik. Ezenfelül kutatás tárgyát képezi a glukagonnak szívrendellenességek gyógyítására való felhasználása. így ez a két alkalmazási terület növekvő igényeket támaszt a glukagon előállításával szemben, mely igények leginkább a természetes forrásokból származó glukagon kinyerésének a tökéletesítése útján elégíthetők ki. Kristályos glukagon előállítását először 1953-ban írták le [Staub és munkatársai, Science 117,628 (1953), Staub és munkatársai, J. Bioi. Chem. 214, 619 (1955)]. Kiindulóanyagként az inzulin ipari előállítása során kapott amorf frakciót használták fel. Az inzulin ezen ipari előállításának lépései: a hasnyálmirigy-szövet savas-alkoholos extrakciója, a 176225
