176104. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás (+) 13ß-alkil-3-metoxi-17-oxo-gonaének mikrobiológiai előállítására

5

176104

6

Táblázat

! 36 óra fermentáció után afermentlébenkimutat! ható vegyöletek aránya

Kiindulási vegyulet

I 17-hidroxi-szár- j !7-oxo-szárma- ! 17-acetát ; mazék(%) ; zék (%) ; származékig)

(± )13ß-etil-3-metoxi-gona-l,3,5(10),8-tetra0n-17ß-ol

60

40

—

( 4- ) 13 ß-et il-3-metoxi-gona-1,3,5(10),8-tetraén-17 ß-ol

20

80

—

( — ) 13 ß-et il-3-metoxi-gona-1,3,5( 10),8-tetraén-17 ß-ol

92

2

5

(+ )13ß-etil-3-metoxi-gona-l,3,5(10),8-tetra0n-17ß-ol.acetät

65

30

5

(+)13ß-etil-3-metoxi-gona-l,3,5(10),8-tetra0n-17ß-ol.hemiszukcinät

70

30

(± ) 13 ß-et i 1-3-metoxi-gona-1,3,5(10)-t rien-17 ß-ol

56

43

1—2

(+) 13 ß-etil-3-metoxi-gona-1,3,5( 10)-trien-17 ß-ol

10

80

5

(—)13 ß-etil-3-metoxi-gona-1,3,5( 10)-trien-17 ß-ol

! 95

2

3

(± ) 13 ß-etil-3-metoxi-gona-1,3,5( 10)-trien-17 ß-ol. acetát

61

37

2

(+ )13 ß-etil-3-metoxi-gona-2,5(10)-di0n-17 ß-ol

10

90

( —)13ß-etil-3-metoxi-gona-2,5(10)-di0n-17ß-ol

96

4

—

( + )ösztradiol-3-metiléter

45

55

—

( +)ösztradiol-3-metilét er

; 5

95

—

kiszűrt sejtet szobahőmérsékleten szárítva, kétszer 500 ml acetonnal extraháltuk. Az acetonos oldatot sejtmentesre szűrtük, vákuumban szárazra pároltuk.

A szárazmaradékot 300 ml etanolban oldottuk, és 3 g szemikarbazid-hidroklorid és 10 ml ecetsav jelenlétében forraltuk 16 órán keresztül. Az oldatot lehűtve, a kristályokat szűrtük. így 4,5 g (+)-13ß-etil-3-metoxi-l,3,5(10)-gonatrién-17-on szemikarbazont kaptunk. A terméket ezután 260 ml dioxánban oldottuk, majd 51 ml 15%-os vizes titán-lll-klorid oldat és 26 ml pH=5,6 -os ecetsav-nátriumacetát puffer oldat jelenlétében forraltuk 10 órán keresztül. Az oldatból kidesztillálva a dioxánt, a maradék vizes oldatot kétszer 100 ml kloroformmal extraháltuk. A szerves fázist vízzel semlegesre mosva, nátriumszulfáton szárítottuk, szűrtük, majd szárazra pároltuk. A szárazmaradékot metanolból kristályosítottuk. így 3,3 g (+)13ß-etil-3-metoxi-l,3,5(10)-gonatrién-17-ont kaptunk. Metanolból átkristályosítva op.: 149—151 C°, [a]D= +98,2° (c=l, kloroform).

3. példa

A baktérium tenyésztés, a szteroid intermedier mikrobiológiai átalakításának körülményei, valamint a reakcióelegy szteroid tartalmának kinyerése megegyezik a

2. példában ismertetettel, a kloroformos oldat szárazra párolt maradékát azonban ez esetben k romát ografálással tisztítottuk. A szárazmaradékot 600 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáltuk. Először 1000 ml ciklohexánnal, majd 1000 ml — 10% etilacetátot tartalmazó — ciklohexánnal eluáltuk az oszlopot. Az utóbbi frakciót szárazra párolva, a szárazmaradékot éterből átkristályosítottuk. így 2,5 g (+)13ß-etil-3-metoxi-l,3,5(10)-gonatrién-17-ont nyertünk. Metanolból átkristályosítva fizikai állandói megegyeztek a 2. példában előállított anyagéval.

Szabadalmi igénypont

Eljárás (+)13ß-alkil-3-metoxi-17-oxo-gona6nek előállítására I általános képletű racém gonaének — ahol R jelentése metil- vagy etil-csoport, Z jelentése pedig II, III vagy IV képletű csoport — sztereoszelektív mikrobiológiai oxidációjával, azzal jellemezve, hogy az I általános képletű racém gonaén származékokat — ahol R és Z jelentése a fenti — Mycobacterium sp. MP—2 (MNG 167) jelű mutáns törzs süllyesztett, levegőztetett és kevert tenyészetével vizes közegben kezeljük, és a képződő jobbraforgató 17-oxo-vegyületeket ismert módon elkülönítjük.

25

30

35

40

45

1 db ábra

A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 81.947.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató

3